胎牛血清对人胚胎神经干细胞分化的影响

胎牛血清对人胚胎神经干细胞分化的影响

一、胎牛血清对人胚胎神经干细胞分化的影响(论文文献综述)

李荣[1](2021)在《MEHP处理胎盘滋养层细胞对共培养神经干细胞分化的影响》文中研究说明背景:邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯[di-(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP]是一种广泛暴露的内分泌干扰物,可以破坏孕妇和胎儿的甲状腺激素调节系统,具有干扰胎盘滋养层细胞甲状腺激素(THs)转运的作用,其进入人体后可能主要通过邻苯二甲酸(2-乙基己基)单酯[mono-2-ethylhexyl phthalate,MEHP]发挥毒性作用。出生前胚胎发育所需的甲状腺激素主要由母体经胎盘转运来供给。而甲状腺激素对生物体神经系统的生长发育至关重要,在神经干细胞的增殖、分化、迁移中,都有甲状腺激素的调节作用。本研究拟观察MEHP对胚胎神经干细胞分化的影响。研究目的:探讨经MEHP处理的胎盘滋养层细胞对共培养胚胎神经干细胞分化的影响。方法:人胎盘滋养层细胞HTR-8经MEHP(0μM、50μM、100μM、180μM)处理24小时后,嵌入transwell共培养体系与人胚胎神经干细胞Re Ncell-CX(细胞融汇约70%)共培养72小时。嵌入前,收集MEHP处理HTR-8细胞0和24小时的培养液,用高效液相色谱-串联质谱法(LC-MS)检测MEHP含量;用细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK8)检测MEHP处理24小时的HTR-8细胞活力;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测MEHP处理HTR-8细胞0和24小时的培养液和细胞内三碘甲状腺素原氨酸(T3)浓度,q RT-PCR和蛋白免疫印迹(WB)检测甲状腺激素代谢酶(DIO2、DIO3)以及受体(TRα、TRβ)的m RNA和蛋白水平。嵌入后,采用1%活性炭吸附处理血清(被认为不含甲状腺激素)的干细胞分化培养液培养(简称分化I液),共培养72小时后,ELISA检测培养液中T3含量,免疫荧光细胞化学法(ICC)和WB检测Re Ncell-CX细胞特异性抗体SOX2,IFC标记星形胶质细胞标志蛋白GFAP,WB检测神经元细胞标志β-TubulinⅢ。此外,神经干细胞分化实验中,设置一个1%未经活性炭吸附处理血清的分化培养液(简称分化II液)的非共培养阳性对照组,和一个分化I液培养的非共培养阴性对照。结果:(1)LC-MS检测结果显示培养液中MEHP含量与设计剂量一致。(2)最高剂量MEHP(180μM)处理组HTR-8细胞增殖率为88%,说明设计剂量未明显抑制细胞增殖,也未产生明显的细胞毒性。(3)MEHP处理减少了HTR-8细胞培养液中T3的消耗(P<0.01)。(4)MEHP处理引起HTR-8细胞甲状腺激素代谢酶DIO2的m RNA表达和蛋白水平下降,而DIO3的m RNA表达和蛋白水平升高(P<0.05)。(5)MEHP处理引起HTR-8细胞甲状腺激素受体(TRα、TRβ)的m RNA表达和蛋白水平下调(P<0.05)。(6)共培养后,神经干细胞向神经元方向分化减少(P<0.05),向星形胶质细胞方向分化增多(P<0.05)。结论MEHP会影响人胎盘滋养层细胞HTR-8甲状腺激素脱碘酶和甲状腺激素受体的表达,处理后的HTR-8细胞会使共培养的人神经干细胞Re Ncell-CX向神经元方向分化减少,向星形胶质细胞方向分化增多。

邵亚丽[2](2020)在《梓醇延迟给药对局灶性永久性脑缺血大鼠的效应及促神经新生作用研究》文中进行了进一步梳理背景梓醇是中药地黄的主要有效成分之一,既往研究表明,梓醇在脑缺血急性期给药具有神经保护作用,能够改善脑缺血大鼠神经行为学功能,促进缺血区周围血管新生和成体神经干细胞增殖存活,但梓醇延迟给药对于脑缺血大鼠的效应以及对神经干细胞的分化作用暂未研究。基于治疗脑缺血疾病药物匮乏的现状,且目前唯一公认有效的静脉溶栓药物组织型纤溶酶原激活剂(tissue plasminogen activator,t PA)的治疗时间窗狭窄(3-4.5 h),该时段内极大多数患者不能及时就医。梓醇作为缺血性脑损伤的潜在保护剂,如果在t PA治疗时间窗外能够保护缺血脑区及周围组织,研究其药效学作用及对新生神经干细胞的分化作用,具有重要的科学价值和临床意义。本课题受国家自然科学基金项目(81873034)资助。目的观察梓醇延迟给药对局灶性永久性脑缺血大鼠的神经行为学影响以及神经新生效应和神经干细胞分化作用研究。方法1.SD大鼠随机分为6组,分为假手术组,模型组,造模后6 h首次给药组(5 mg/kg和10 mg/kg),造模后4 d首次给药组(5 mg/kg和10 mg/kg),电凝法制备局灶性永久性脑缺血(permanent middle cerebral artery occlusion,p MCAO)模型,给药组腹腔注射梓醇,对照组注射同等剂量生理盐水,每日一次,连续7天。各组大鼠分别于给药后1,4,7,14,21,28天进行体重测量及Bederson评分,神经功能缺损评分(modified neurologic severity score,m NSS),肌力测试评分(muscle strength),对神经功能恢复进行评价。2.结合Brd U体内标记细胞增殖,梓醇给药7,14,21,28天后各组大鼠取材,免疫荧光双标Brd U/Nestin检测室管膜下区(subventricular zone,SVZ)神经干细胞增殖存活情况,Brd U/GFAP,Brd U/DCX和Brd U/Neu N荧光双标检测神经干细胞分化为星形胶质细胞及神经元情况;免疫印迹法(Western Blot,WB)检测各组损伤侧SVZ区Nestin/DCX以及损伤侧皮层GFAP和Neu N的蛋白表达。3.由于新生鼠SVZ数量少且难以分离,本研究选择原代培养24 h内新生鼠海马区神经干细胞,进行纯化鉴定,Brd U标记细胞增殖,cck-8检测不同浓度的梓醇对神经干细胞活力的影响,加入分化培养基诱导干细胞分化,免疫荧光MAP-2,GFAP,MBP检测细胞分化,WB检测分化表型相关蛋白的表达。结果1.成功制备局灶性脑缺血模型,梗死体积为9.62±2.43%。行为学实验结果表明,梓醇给药组不同程度促进脑缺血大鼠体重增长,降低脑缺血大鼠Bederson和神经功能缺损评分,提高肌力测试评分,6h,5mg/kg组肌力测评分在14天时有显着差异(P<0.05,vs model),21天时各组神经功能基本恢复至假手术水平,各给药组间无显着差异(P>0.05,vs sham)。2.梓醇给药后不同时点促进局灶永久性脑缺血大鼠损伤侧SVZ区神经干细胞增殖存活,Brd U/Nestin荧光结果提示脑区成体神经干细胞存在的事实。脑缺血后7天及14天,星形胶质细胞数量显着增加(P<0.05,vs model),新生神经干细胞与神经元数量与模型组相比显着增加(P<0.05,vs model),14天时DCX表达增强,6 h,5 mg/kg剂量组与模型组相比有显着差异(P<0.05,vs model),其余给药组与假手术相比有显着差异(P<0.05,vs sham),21天时各给药组GFAP表达降低,Nestin,Neu N表达增强,与模型组相比有显着差异(P<0.05,vs model),与行为学结果基本一致。3.海马神经干细胞培养7 d后可增殖为直径为200μm左右的神经球,神经球呈现Brd U/Nestin免疫双标阳性;cck-8筛选出促进神经干细胞生长的梓醇浓度为0.1,1,10,100μM;用不同浓度的梓醇诱导P3代神经干细胞分化7天,可见MAP-2阳性的神经元,GFAP阳性的星形胶质细胞及MBP阳性表达的少突胶质细胞;10μM梓醇促进NSCs向神经元方向分化,0.1μM促进向星型胶质细胞方向分化。结论1.梓醇延迟给药促进局灶性永久性脑缺血大鼠体重增长,改善神经行为学评分。2.梓醇延迟给药促进局灶性永久性脑缺血大鼠损伤侧SVZ区神经干细胞增殖,促进缺血区域附近神经元存活,减少星形胶质细胞增殖。3.原代培养的海马神经干细胞具有旺盛的自我增殖和多向分化潜能,梓醇对神经干细胞向神经元和胶质细胞分化的作用有剂量效应。

文冰[3](2020)在《miR-221在人乳牙牙髓干细胞神经分化过程中的作用及机制研究》文中指出背景和目的:人乳牙牙髓干细胞(stem cells fromhuman exfoliated deciduous teeth,SHED)是人类脱落的乳牙牙髓中分离得到的一种属于外胚间充质干细胞的牙源性干细胞,具较强的增殖能力及分化成身体各种类型细胞的潜能,组织来源方便,是细胞治疗和再生医学所需干细胞的理想来源。基于人乳牙牙髓干细胞在特定的培养环境中向神经元分化的特性,人乳牙牙髓干细胞在神经退行性疾病的治疗中发挥着重要作用。最新研究发现mi RNA(micro-RNA,小RNA)在人乳牙牙髓干细胞向神经元样细胞分化过程中差异表达,在神经元分化中发挥重要作用,但其在人乳牙牙髓干细胞神经分化中的作用机制尚不清楚我们前期的工作发现mi RNA-221(micro-RNA 21,小RNA221)在人乳牙牙髓干细胞神经分化过程表达上调,并调控人乳牙牙髓干细胞神经分化效率,我们推测mi R-221调控人乳牙牙髓干细胞神经分化。本论文将研究mi R-221在人乳牙牙髓干细胞神经分化过程中的作用及其调控机制,确定mi R-221的靶基因,明确mi R-221调控人乳牙牙髓干细胞神经分化的信号通路,并确定mi R-221通过靶基因调控人乳牙牙髓干细胞神经分化特异信号通路的分子机制。本论文将为人乳牙牙髓干细胞神经分化调控机制的研究提供新的理论基础和新的方向。材料和方法:1.mi RNA-221在人乳牙牙髓干细胞神经分化过程中的表达模式及作用(1)通过流式细胞仪检测人乳牙牙髓干细胞的间充质干细胞特异表面抗原标志物CD29(integrin subunit beta 1,β1整合素)、CD90(Thy-1 cell surface antigen,Thy-1细胞表面抗原)、CD146(melanoma cell adhesion molecule,黑色素瘤细胞粘附分子)和STRO-1(Stromal cell antigen,基质细胞抗原),细胞粘附分子CD13(membrane alanyl aminopeptidase,膜丙氨酸氨基肽酶)和CD44(CD44 molecule,CD44分子),造血干细胞阳性标志物CD34(CD34molecule,CD34分子)和CD45(protein tyrosine phosphatase receptor type C,蛋白酪氨酸磷酸酶受体C型)和内皮细胞特异性抗原标记物CD31(platelet and endothelial cell adhesion molecule 1,血小板和内皮细胞粘附分子1)的阳性率;通过免疫荧光实验检测人乳牙牙髓干细胞STRO-1的表达。(2)通过流式细胞仪检测人乳牙牙髓干细胞分化的神经元细胞的成熟神经元特异性抗原标志物NSE(enolase 2,烯醇化酶2)、MAP-2(microtubule associated protein 2,微管联合蛋白-2)、NF-M(neurofilament medium,神经丝蛋白)和TH(tyrosine hydroxylase,酸羟化酶)和神经干细胞特异性抗原Nestin(巢蛋白)的阳性率;通过免疫荧光实验检测人乳牙牙髓干细胞分化的神经元细胞NSE和MAP-2的表达。(3)通过q-PCR检测在人乳牙牙髓干细胞向神经元细胞分化过程中第0、2、4、6、8、10和12天mi RNA-221的表达水平。(4)通过流式细胞仪检测mi R-221 inhibitor(mi R-221抑制剂)、mi R-221mimic(mi R-221模拟物)、Blank(空白对照)和NC(Negative control RNA,阴性对照RNA)转染人乳牙牙髓干细胞后分化成神经元细胞特异标志物NSE和MAP-2的阳性率。2.mi RNA-221的靶基因确定(1)通过生物信息学分析预测mi R-221的靶基因。(2)通过双荧光素酶报告基因分析实验验证mi R-221与靶基因的相互作用。(3)通过q-PCR和western blotting检测在人乳牙牙髓干细胞神经分化过程mi R-221的靶基因CHD8(chromodomain helicase DNA binding protein 8,染色质螺旋酶DNA结合蛋白8)的m RNA和蛋白表达水平。(4)通过q-PCR和western blotting检测mi R-221 inhibitor、mi R-221mimic、Blank和NC转染人乳牙牙髓干细胞后CHD8的m RNA和蛋白表达水平。3.mi RNA-221调控人乳牙牙髓干细胞Wnt(wingless,无翼的)/β-catenin(β连环蛋白)通路的分子机制(1)通过q-PCR和western blotting检测人乳牙牙髓干细胞神经分化过程中Wnt/β-catenin通路特异标志物β-catenin、Wnt3A(Wnt family member3A,Wnt家族蛋白3A)、cyclin D1(细胞周期蛋白D1)、cMyc(transcriptional regulator Myc-like,Myc样转录调节因子)、c-Jun(Jun proto-oncogene AP-1 transcription factor subunit,Jun原癌基因AP-1转录因子亚基)和MMP7(matrix metallopeptidase 7,基质金属肽酶7)的m RNA和蛋白表达水平。(2)通过q-PCR和western blotting检测mi R-221 inhibitor、mi R-221

米尼德日玛[4](2020)在《脑脊液对人脐带间充质干细胞源性的神经干细胞增殖与分化的影响》文中研究说明目的:探讨不同浓度脑脊液(Cerebrospinal Fluid,CSF)对人脐带间充质干细胞(Human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUC-MSCs)源性的神经干细胞(Neural stem cells,NSCs)增殖与分化的影响,以期为神经退行性疾病的NSCs移植修复治疗提供理论依据。方法:(1)取健康新生足月儿脐带在体外分离培养HUC-MSCs,传代培养至P3代后定向诱导成NSCs并以流式细胞仪检测NSCs特异性表面标记物Nestin(neuroepithelial stem cell protein,神经巢蛋白)的表达。(2)将HUC-MSCs源性的NSCs制备成单细胞悬液,均匀接种于96孔板中,加入不同浓度的脑脊液(0%,5%,10%,20%,30%,50%),标记为:0%CSF组(空白对照组)、5%CSF组、10%CSF组、20%CSF组、30%CSF组、50%CSF组,HUC-MSCs源性NSCs与各浓度组脑脊液共培养72h后,MTT比色法检测各组不同浓度脑脊液对HUC-MSCs源性NSCs增殖率的影响。(3)取传代培养后生长状态良好的HUC-MSCs源性的NSCs,接种于24孔板中,制备细胞爬片,加入以上不同浓度的脑脊液共培养14天后进行神经元标志物MAP-2(Microtubule associated protein 2,微管相关蛋白2)及星形胶质细胞标志物GFAP(Glial fibrillary acidic protein,胶质纤维酸性蛋白)的细胞免疫荧光染色,观察HUCMSCs源性的NSCs向神经元及星形胶质细胞分化的情况。结果:(1)HUC-MSCs源性NSCs与不同浓度脑脊液共培养72h后,5%CSF组、10%CSF组、20%CSF组、30%CSF组、50%CSF组的相对增殖率分别为:(107±8.39)%、(131±15.44)%、(154±19.71)%、(178±26.46)%、(206±22.43)%,与对照组((100±0.00)%)比较,除5%脑脊液,10%、20%、30%、50%脑脊液作用于HUC-MSCs源性NSCs 72h后均显着提高其增殖(P<0.01)。(2)HUC-MSCs源性的NSCs在不同浓度脑脊液中分化培养的第14天,对照组及各实验组中均能观察到MAP-2(+)的神经元及GFAP(+)的星形胶质细胞,0%CSF组(空白对照组)、5%CSF组、10%CSF组、20%CSF组、30%CSF组、50%CSF组细胞的MAP-2(+)细胞比例分别为:(16.01±0.49)%、(16.30±1.01)%、(16.39±0.71)%、(16.55±0.91)%、(25.06±0.65)%、(29.38±0.73)%;GFAP(+)细胞比例分别为:(6.80±0.69)%、(7.01±0.98)%、(7.14±0.75)%、(7.75±1.10)%、(12.55±1.39)%、(17.21±0.99)%。与对照组比较,30%、50%CSF组的HUC-MSCs源性NSCs向神经元及星形胶质细胞分化的比例明显升高(P<0.01),而5%、10%、20%CSF组的HUC-MSCs源性NSCs向神经元及星形胶质细胞分化的比例未见明显差异(P>0.05)。结论:(1)HUC-MSCs能够在体外定向诱导为NSCs,并且可进一步分化为神经元及星形胶质细胞。(2)脑脊液浓度达到10%时,即可促进HUC-MSCs源性NSCs的体外增殖。(3)脑脊液浓度达到30%时,可促进HUCMSCs源性NSCs向神经元及星形胶质细胞方向分化。(4)HUC-MSCs源性NSCs在5%-50%低中浓度正常脑脊液中,较星形胶质细胞更易向神经元方向分化。

朱庆元[5](2020)在《干细胞移植数量和时间点对脑卒中治疗效果的初步探索》文中认为中国的脑卒中发病率居世界首位,死亡率居世界第二,其中缺血性脑卒中约占60.3~85%。缺血性脑卒中是由于脑缺血核心区神经细胞的不可逆损伤所导致,然而缺血半暗带神经细胞的死亡来源于二次损伤,抑制二次损伤修复功能已成为当前治疗卒中的主要目标之一。大量临床前研究显示干细胞移植治疗已成为卒中治疗的一种潜在的、新的、有效的治疗方法,但仍缺乏干细胞移植能使缺血性卒中患者获益的临床证据。当前的研究发现,细胞的移植数量和时间点等会影响到脑卒中患者的治疗结果。针对这两点,本论文开展了系列的研究。首先对移植的主要细胞类型神经干细胞、间充质干细胞和内皮细胞培养鉴定。然后针对细胞移植数量,将每种细胞类型设置了正常细胞量组、1/2细胞量组、1/10细胞量组和自然恢复组,在脑卒中模型后第4天移植;针对细胞移植时间,设置了急性期组,恢复期组,后遗症期组和自然恢复组。然后在第9周进行神经功能综合评分。从结果来看,间充质干细胞、神经干细胞、内皮细胞在临床前细胞量上进行移植都有疗效(p<0.05),特别是间充质细胞相较于其他两种细胞可能在免疫调控上的更显优势,即使在实验量减半的情况下,依然有效(p<0.001),此外从外周静脉输入的神经干细胞,无法有效到达梗死部位(p>0.05),而脑内梗死区附近移植的神经干细胞即使减量到一半,也同样还是有一定效果(p<0.05)。移植时间点上,发现在卒中的不同时期内皮移植都有一定作用(p<0.05)。综上,移植细胞量不足可能是疗效不明显的原因,移植时间点可能直接对疗效影响不显着,但和移植路径一样可能是影响最终有效细胞治疗量。然后针对以往直接移植神经干细胞存活率低,我们对在体外血管化神经球做了一点初步探索。

刘畅[6](2020)在《人少突胶质前体细胞冻存体系的优化研究》文中研究说明背景:少突胶质细胞前体细胞(Oligodendrocyte Precursor Cells,OPCs)存在于中枢神经系统(Central Nervous System,CNS)中,具有迁移、增殖及分化为成熟少突胶质细胞(Oligodendrocytes,OLs)并形成髓鞘结构的能力;脱髓鞘相关疾病是以髓鞘缺失为主要特征的一类神经系统疾病,如:脊髓损伤(Spinal Cord Injury,SCI)、多发性硬化(Multiple Sclerosis,MS)、脑白质损伤(White Matter Injury,WMI)等,OPCs被认为是移植治疗脑脱髓鞘及脱髓鞘相关疾病疾病最具潜力的细胞。人OPCs有效的冷冻保存有助于对其开展基础乃至临床转化研究,但人源OPC的冷冻保存一直存在研究体系不完整的关键问题。目的:通过探究优化冻存过程中的不同影响因素,开发针对人胎脑神经干细胞来源OPCs的冻存方法。方法:贴壁培养人胎脑神经干细胞来源的OPCs,比较使用消化和机械吹打两种方法收集细胞冻存前活率。择优后通过探究:冻存密度(0.5-3.5×106/mL)、不同冻存液(7种冻存液)、冻存速率(冻存盒慢速降温和液氮气相快速降温)、以及冷冻保存时间(长-短期储存)4个因素冻存复苏后台盼蓝染色细胞活率的影响。在优选后的冻方案基础上,复苏后培养7天通过细胞免疫荧光染色法,流式细胞术检测OPCs特异性标志物PDGFR-α、A2B5、NG2表达情况,使用细胞免疫荧光染色法检测增殖相关Ki67抗原表达,CCK8增殖实验,Transwll迁移实验,单细胞全转录组测序实验分析冻存复苏对人OPCs特性和功能影响。结果:使用消化法收集人OPCs明显提高冻存前细胞活率;冻存浓密在0.5-3.5×106/mL范围内,密度升高,复苏活率逐渐提高;快速降温4组复苏活率均低于30%且无法继续贴壁培养,慢速降温4组复苏活率均较高。最终选定使用消化法收集细胞,2×106/mL冻存密度,使用含海藻糖的冻存液G,慢速降温冻存为优选冻存人OPCs方案,复苏活率最高,可达(75.73±6.66)%;储存半年内不影响复苏活率,冻存前后OPCs特异性标记物PDGFR-α、A2B5、NG2表达无差异;细胞增殖、迁移能力及相关基因表达无差异;冻存复苏后保留分化潜能。结论:采用消化法收集人OPCs,使用含海藻糖的冻存液G慢冻快融的方法,能得到较高复苏活率,适用于人胎脑神经干细胞诱导OPCs冷冻保存,复苏后不影响细胞功能和标志物表达。

王璐[7](2019)在《淫羊藿素调控人脐带间充质干细胞的凋亡及线粒体自噬的机理研究》文中进行了进一步梳理干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞,具有十分广阔的应用前景,已被广泛应用至多种疾病的临床研究中,但是临床上移植入体内的干细胞存活率低,限制了其推广应用。因此,亟需新的治疗策略改进干细胞抵御体内恶劣微环境的能力。天然药物独具优势,前期实验发现淫羊藿素(icaritin,ICT)预处理后的人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)治疗急性肝衰竭大鼠,死亡率进一步降低,肝脏病理、肝功能得到进一步改善,但是内在机理尚不清楚。预实验发现ICT可以增加体外培养的hUC-MSCs的细胞活力,调节多种细胞因子的分泌,并减少细胞的凋亡,电镜下可见ICT减少了自噬小体包裹的线粒体数量,因此,本研究将从细胞凋亡与线粒体自噬入手,探索淫羊藿素影响人脐带间充质干细胞的机制,为中药联合干细胞疗法提供理论依据。目的:本研究首先通过文献综述,为实验提供理论支持;随后在体外采用无血清培养部分模拟体内微循环障碍的环境,使用ICT干预hUC-MSCs,探索其是否具有抗凋亡作用,并深入研究是否通过HGF(肝细胞生长因子)/c-Met通路发挥作用;观察ICT能否干预hUC-MSCs的线粒体自噬过程;同时采用蛋白质谱,分析ICT预处理后的hUC-MSCs的差异表达蛋白,并进行GO分析、KEGG分析、蛋白互作分析等生物信息学分析,评估淫羊藿素参与的生物学过程。方法:人脐带间充质干细胞无血清培养72小时作为基本的造模方式,模拟微循环障碍的体内环境。不同浓度的ICT干预造模细胞,用MTS法测定其0D值,筛选最佳处理浓度。BrdU掺入试验检测Control组(正常培养组)、Serum free组(无血清培养组)、ICT组(淫羊藿素组)、HGF组(肝细胞生长因子组)的细胞增殖率。ELISA法检测ICT促进hUC-MSCs的HGF分泌情况。WB与qRT-PCR法检测ICT影响hUC-MSCs的c-Met受体表达情况。转染构建c-Met+MSCs,通过qRT-PCR和WB检验其转染效率。使用CCK8法筛选c-Met受体抑制剂克唑替尼(crizotinib)的最佳作用浓度。采用AnnexinV-FITC/PI凋亡检测,评估各组细胞凋亡率。qRT-PCR与WB检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase-3、Bax的表达。MTS法检测不同浓度的自噬抑制剂3MA对造模细胞的影响。使用qRT-PCR、WB以及免疫荧光显微镜检测线粒体外膜蛋白tomm20、线粒体内膜蛋白timm23、线粒体基质蛋白细胞色素c氧化酶亚基II(MT-C02)、自噬相关蛋白LC3B的表达情况。透射电镜观察各组细胞的超微结构,重点观察其线粒体自噬水平。采用qRT-PCR筛选ICT干预hUC-MSCs线粒体自噬的相关通路。使用JC-1膜电位检测试剂盒检测膜电位情况。采用蛋白质谱进行各组细胞差异蛋白的生物信息学分析。结果:1.不同浓度的淫羊藿素处理无血清培养hUC-MSCs,各处理浓度均提高了其细胞活力,但是仅50ng/ml(0.1uM)、100ng/ml具有统计学意义(P<0.05)。选择50ng/ml为最佳处理浓度进行后续实验。BrdU检测显示较Control组,Serum free组增殖率下降(P<0.05),而使用ICT或者HGF均提高了细胞增值率(P<0.05)。2.人脐带间充质干细胞本身可分泌HGF,也表达HGF的受体c-Met,而ICT能够促进其表达更高水平的HGF与c-Met受体(P<0.05)。构建c-Met+MSCs后,WB与qRT-PCR法证实了基因转染成功。根据细胞抑制率,筛选4 u M为克唑替尼(c-Met受体抑制剂)的最佳处理浓度。MSCs在无血清培养72h时凋亡率较高,c-Met+MSCs的细胞凋亡率显着降低(P<0.01),克唑替尼处理后,细胞凋亡率显着增高(P<0.01),提示HGF/c-Met通路对于MSCs具有抗凋亡作用。WB显示,对比MSCs组,c-Met+MSCs组Bcl-2的表达上调且Cleaved caspase-3、Bax表达下调(P<0.05),克唑替尼则使Bcl-2蛋白水平降低,Cleaved caspase-3和Bax蛋白表达增加,qRT-PCR验证了上述结论。提示HGF/c-Met通路通过调控凋亡蛋白的表达发挥抗凋亡作用。3.MSCs在无血清培养72h时凋亡率较高,ICT或HGF处理后,MSCs凋亡率显着降低(P<0.05)。当使用c-Met受体抑制剂克唑替尼时,拮抗了 ICT的抗凋亡作用,差异有统计学意义(P<0.01)。这表明克唑替尼可以抑制ICT对MSCs的保护作用,ICT对MSCs的抗凋亡作用与HGF/c-Met通路相关。WB显示,ICT或HGF处理后的MSCs的Bcl-2表达上调且Cleaved caspase-3、Bax表达下调(P<0.05),对比ICT组,加用克唑替尼后可使Bcl-2蛋白水平降低,使Cleaved caspase-3和Bax蛋白的表达增加,qRT-PCR验证了上述结论。提示ICT通过HGF/c-Met通路调控凋亡蛋白的表达发挥抗凋亡作用。4.低浓度的自噬抑制剂3-MA对造模细胞的活性具有促进作用(P<0.05),而高浓度的自噬抑制剂3-MA抑制了细胞活性(P<0.01)。提示无血清培养条件下,适度的抑制细胞自噬有利于细胞的存活,而过度的抑制细胞自噬则会降低细胞活力,不利于细胞存活。5.与Control组比较,Serum free组MSCs的线粒体外膜蛋白tomm20、线粒体内膜蛋白timm23、线粒体基质蛋白细胞色素c氧化酶亚基Ⅱ(MT-C02)均会减少,自噬蛋白LC3Ⅰ和LC3Ⅱ表达均增加,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比率提高,线粒体膜电位降低,提示线粒体自噬水平被上调,电镜可见细胞内“线粒体自噬体”(被自噬小体包裹的线粒体)显着增多,损伤线粒体增加,细胞形态不佳,证实了无血清培养增加了线粒体自噬;而ICT或者HGF干预后上述线粒体蛋白表达增加,自噬蛋白LC3Ⅰ和LC3Ⅱ表达均减少,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比率降低,线粒体膜电位升高,提示线粒体自噬水平被下调。电镜可见胞内“线粒体自噬体”减少,损伤线粒体减少,细胞形态得到一定的改善,证实了ICT和HGF均减少了线粒体自噬。6.采用qRT-PCR进行Pink1/Parkin通路,FUNDC1通路以及Bnip3/Nix通路的筛选,结果如下:Pink1、Bnip3的mRNA与前述线粒体自噬趋势相符,Nix、FUNDC1的mRNA呈现出相矛盾的趋势。7.蛋白质谱分析:通过GO分析,发现Control组与Serum free组的差异蛋白,以及ICT组与Serum-free组之间,HGF组与Serum free组之间的差异蛋白,均参与细胞凋亡、自噬、线粒体自噬相关的生物过程(P<0.05)。对ICT组与Serum free组的差异蛋白进行分析,AKT1位于蛋白互作中心节点位置,KEGG分析PI3K-AKT通路具有统计学意义,可作为研究的重点通路。对于HGF组与Serum free组之间的差异蛋白进行分析,筛选出NF-κ B通路作为研究重点通路。结论:1.淫羊藿素能够通过HGF/c-Met通路降低无血清培养的人脐带间充质干细胞的凋亡率,与调节Cleaved Caspase-3、Bax及Bcl-2蛋白表达水平有关。2.淫羊藿素或肝细胞生长因子均可降低无血清培养的人脐带间充质干细胞的线粒体自噬水平,减少损伤线粒体数目,改善细胞形态,增加线粒体蛋白tomm20、timm23、MTC02的表达,提高线粒体膜电位。3.蛋白质谱分析发现淫羊藿素或肝细胞生长因子介导的差异蛋白参与细胞凋亡、自噬、线粒体自噬相关的生物过程,对于ICT,PI3K-AKT通路可作为研究重点通路,对于HGF,NF-κ B通路可作为研究重点。

叶妮[8](2019)在《黄芪多糖调控脱髓鞘小鼠髓鞘再生及神经干细胞定向分化的作用机制研究》文中提出目的:观察黄芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS)对脱髓鞘小鼠髓鞘再生的影响,进一步研究其对神经干细胞定向分化的调控作用及可能的作用机制。方法:动物实验:1.C57BL/6小鼠经随机数字表法分为三组:正常组、双环己酮草酰二腙(Cuprizone,CPZ)组和APS组。用含0.2%CPZ饲料饲喂CPZ组和APS组小鼠5周,制备脱髓鞘模型,确认成模后换为正常饲料饲喂两周,诱导自发的髓鞘再生。从实验的第5周起至第7周末,每日给予APS组小鼠500 mg/kg APS灌胃干预,CPZ组小鼠每日给予0.2 m L生理盐水灌胃。正常组小鼠饲喂正常饲料7周;2.通过监测三组小鼠体重、转身时间及平衡木行走时间,观察APS对脱髓鞘小鼠神经功能障碍的影响;通过劳克坚牢蓝(Luxol fast blue,LFB)染色检测三组小鼠胼胝体的髓鞘密度,研究APS对小鼠髓鞘再生的调控作用;3.通过Real-time PCR法、Western blot法及免疫组织化学染色法检测三组小鼠胼胝体中神经干细胞的标志性分子--巢蛋白(Neuroectodermal stem cell marker,Nestin)、星形胶质细胞的标志性分子--胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)、少突胶质细胞的标志性分子--髓鞘碱性蛋白(Myelin basic protein,MBP)、神经元的标志性分子--神经元特异性核心抗原(Neuron specific nuclear protein,Neu N)m RNA及蛋白的表达水平,研究APS在体内对神经干细胞定向分化的调控作用;4.通过Real-time PCR法及Western blot法检测三组小鼠胼胝体中Sonic hedgehog信号通路的关键分子--配体Shh、受体Ptch1、受体Smo、转录因子Gli1 m RNA及蛋白的表达水平,研究APS在体内调控神经干细胞向少突胶质细胞定向分化的分子机制。细胞实验:1.建立C17.2小鼠神经干细胞的体外培养体系及分化模型,进行模型鉴定,设置0.1μg/m L、1μg/m L、10μg/m L、100μg/m L、1 mg/m共5个浓度的APS干预组,以及PBS对照组,干预分化4天;2.通过Real-time PCR法及Western blot法检测6组细胞中Nestin、GFAP、MBP及Neu N m RNA及蛋白的表达水平,研究APS在体外对C17.2神经干细胞定向分化的调控作用;3.通过Real-time PCR法及Western blot法检测6组细胞中Shh、Ptchl、Smo、Gli1 m RNA及蛋白的表达水平,研究APS在体外调控C17.2神经干细胞向少突胶质细胞定向分化的分子机制。结果:1.动物实验中,与CPZ组小鼠相比,APS组小鼠的转身时间及平衡木行走时间均下降(P<0.01),髓鞘密度明显上升(P<0.01),表明APS可以有效缓解脱髓鞘小鼠的神经功能障碍,并促进髓鞘再生;2.动物实验中,与CPZ组小鼠相比,APS组小鼠胼胝体和侧脑室下区中Nestin m RNA及蛋白的表达水平均下调(P<0.01),表明APS在体内可以抑制神经干细胞的干性维持,促进其进入分化状态。APS组小鼠胼胝体中GFAP m RNA及蛋白的表达水平均下调(P<0.05);MBP、Neu N m RNA及蛋白的表达水平均上调(P<0.05),表明APS在体内可以有效调控神经干细胞的定向分化,抑制其向星形胶质细胞的定向分化,促进向少突胶质细胞及神经元的定向分化;3.动物实验中,与CPZ组小鼠相比,APS组小鼠胼胝体中Smo、Gli1 m RNA及蛋白的表达水平均上调(P<0.01),Ptch1蛋白的表达水平明显下调(P<0.01),表明APS在体内调控神经干细胞向少突胶质细胞定向分化的分子机制可能与促进Sonic hedgehog信号通路的激活有关;4.细胞实验中,与对照组相比,随着APS浓度的上升,分化模型中的细胞Nestin m RNA及蛋白的表达水平逐渐下调(P<0.01),表明APS在体外可以抑制C17.2神经干细胞的干性维持,促进其进入分化状态。GFAP m RNA及蛋白的表达水平逐渐下调,MBP、Neu N m RNA及蛋白的表达水平逐渐上调(P<0.01),表明APS在体外可以有效调控C17.2神经干细胞的定向分化,抑制其向星形胶质细胞的定向分化,促进向少突胶质细胞及神经元的定向分化;5.细胞实验中,与对照组相比,随着APS浓度的上升,分化模型中的细胞Shh、Smo、Gli1 m RNA及蛋白的表达水平逐渐上调(P<0.01),Ptch1 m RNA及蛋白的表达水平逐渐下调(P<0.01),表明APS在体外调控C17.2神经干细胞向少突胶质细胞定向分化的分子机制可能与促进Sonic hedgehog信号通路的激活有关。结论:1.APS可以有效地缓解脱髓鞘小鼠的神经功能障碍,并促进髓鞘再生;2.APS促进髓鞘再生的机制与调控神经干细胞向少突胶质细胞的定向分化有关;3.促进Sonic hedgehog信号通路的激活可能是APS调控神经干细胞向少突胶质细胞定向分化的分子机制之一。

张奇贤[9](2019)在《过表达脑源性神经营养因子的神经干细胞移植治疗大鼠放射性认知功能障碍的研究》文中研究指明第一部分 胎鼠神经干细胞的分离培养、慢病毒感染以及移植前的鉴定实验目的:神经干细胞(neural stem cell,NSCs)移植在治疗放射性认知功能障碍方面具有极大潜力。分离和培养神经干细胞是进行移植治疗的基础。使用携带脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)基因的慢病毒感染,使之过表达脑源性神经营养因子,从而为后续研究做准备。材料和方法:取胎龄14至15天的Sprague Dawley胎鼠脑皮质部位的神经干细胞进行培养,之后使用携带绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)和BDNF基因的慢病毒感染细胞。使用巢蛋白(nestin)免疫荧光染色技术对所培养的神经干细胞进行鉴定。结果:分离培养的神经干细胞在两种慢病毒(GFP-lentivirus、GFP-BDNF-lentivirus)感染后被GFP成功标记。且被GFP-BDNF-lentivirus感染的神经干细胞内BDNF蛋白表达含量明显升高。这些神经干细胞球nestin免疫荧光染色结果为阳性。结论:使用GFP-BDNF-lentivirus感染细胞后可成功获得过表达BDNF的神经干细胞,这为下一部分实验做好了准备。第二部分 神经干细胞移植后迁移、分化以及向神经环路整合情况的研究实验目的:由移植的神经干细胞分化而来的神经元能在何种程度上整合入海马原有神经环路尚不清楚。本部分研究中将探讨辐射暴露后大鼠海马内微环境的改变是否会对移植的过表达BDNF的神经干细胞的迁移、分化以及向神经环路的整合产生影响。材料和方法:1)给予大鼠单次全脑照射20Gy 4周后,将过表达BDNF的神经干细胞移植入大鼠海马内,观察移植的神经干细胞的迁移和分化情况。2)给予大鼠单次全脑照射20Gy 4周后,将辅助用慢病毒感染后的神经干细胞移植入大鼠海马内。在移植后第10天,向大鼠左侧海马内注射狂犬病毒进行跨单突触逆向示踪,评估移植的神经细胞向原有神经环路的整合情况。对照组为未受射线照射的移植组。结果:1)对照组大鼠海马内内移植的GFP-NSCs迁移并定植于齿状回颗粒细胞下层;全脑照射组大鼠海马内移植的GFP-BDNF-NSCs部分可迁移定植于颗粒细胞下层;全脑照射组大鼠海马内移植的GFP-NSCs散在分布于海马内,且GFAP+细胞比例明显高于其余两组。2)BDNF-NSCs移植入全脑照射组大鼠海马内后可与原有神经环路建立突触联系,其整合效率明显高于R+GFP-NSCs组。结论:过表达BDNF的神经干细胞移植入全脑辐射暴露大鼠海马内后可迁移定植于颗粒细胞下层,且可与原有神经环路建立突触联系。第三部分神经干细胞移植后大鼠认知功能及海马微环境变化情况的研究实验目的:神经干细胞移植后与宿主的微环境之间存在相互作用。本部分研究中将探讨向辐射暴露后的大鼠脑内移植的BDNF-NSCs对海马微环境的影响。同时将检测神经干细胞移植后大鼠认知功能的改变情况。材料和方法:1)给予大鼠单次全脑照射20Gy 4周后,将过表达BDNF的神经干细胞移植入大鼠海马内,检测移植后大鼠海马内BDNF、神经生长因子(nerve growth factor,NGF)及胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)表达水平和活化的小胶质细胞的数量;2)给予大鼠单次全脑照射20Gy 4周后,将过表达BDNF的神经干细胞移植入大鼠海马内,使用Morris水迷宫实验检测移植后大鼠认知功能的改变情况。结果:与单纯全脑照射组相比,R+GFP-BDNF-NSCs组大鼠海马内BDNF、NGF表达水平明显升高,活化的小胶质细胞的数量未见明显减少。神经干细胞移植后大鼠的认知功能未见显着改善。结论:过表达BDNF的神经干细胞移植入全脑辐射暴露大鼠海马内后可提高海马内营养因子的表达水平,但未能显着改善大鼠的认知功能。

谢正兴[10](2017)在《CO预处理神经干细胞在出血性脑卒中的作用及机制研究》文中研究表明目的研究铁过载对神经干细胞的损伤作用以及一氧化碳预处理对神经干细胞铁过载损伤的保护作用及其机制,并进一步探讨CO预处理神经干细胞在出血性脑卒中的作用。方法体外用氯化亚铁模拟出血性脑卒中后铁过载环境,用CORM-2释放CO预处理神经干细胞,采用CCK-8评估铁过载的神经毒性;用流式细胞术和TUNEL染色分析评估神经干细胞的凋亡;免疫荧光技术及Western blotting技术检测蛋白水平的变化;real time PCR技术检测相关基因m RNA的表达水平;通过荧光探针DCFH-DA对细胞内活性氧的检测;采用Nrf2Si RNA和NF-κB信号通路抑制剂验证Nrf2和NF-κB的作用;体内研究利用RFP转基因小鼠的原代神经干细胞评价植入后神经干细胞存活的情况以及CO预处理神经干细胞植入后分化成熟的情况;并对各组出血性卒中鼠的神经功能进行评估。结果铁过载可诱导神经干细胞凋亡,铁过载后神经干细胞内活性氧增加,而一氧化碳预处理可抑制活性氧的增加。一氧化碳可进一步抑制铁过载引起的活性氧依赖的NF-κB核转位活化,进而抑制促凋亡蛋白Bax、cleaved-caspase3的表达,增加抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达,从而抑制凋亡的发生。一氧化碳预处理可导致神经干细胞Nrf2的核转位活化,进而促进抗氧化酶NQO-1的表达增加,发挥抗氧化作用。CO的保护作用是Nrf2依赖的。CO预处理可增加神经干细胞GDNF、VEGF以及BDNF表达。与对照组相比,CO预处理可增加植入神经干细胞在出血性卒中鼠中的存活,CO预处理组的出血性卒中鼠的神经功能恢复显着改善。结论CO预处理可活化Nrf2调节神经干细胞内氧化还原平衡来抑制铁过载诱导的NF-κB活化,最终对神经干细胞铁过载损伤的起保护作用。CO预处理神经干细胞可促进其旁分泌神经营养因子,增加对出血后病理环境的耐受,有望提高神经干细胞治疗出血性脑卒中的疗效。

二、胎牛血清对人胚胎神经干细胞分化的影响(论文开题报告)

(1)论文研究背景及目的

此处内容要求:

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例:

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

(2)本文研究方法

调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、胎牛血清对人胚胎神经干细胞分化的影响(论文提纲范文)

(1)MEHP处理胎盘滋养层细胞对共培养神经干细胞分化的影响(论文提纲范文)

英文缩略词表
中文摘要
Abstract
1 前言
2 材料和方法
    2.1 主要材料
    2.2 主要试剂配制
    2.3 主要仪器设备
    2.4 实验方法
3 结果
    3.1 不同剂量 MEHP处理HTR-8 细胞0 h和24 h后上清液中MEHP的含量
    3.2 MEHP 处理 HTR-8 细胞不明显影响细胞活力
    3.3 MEHP处理减少了HTR-8 细胞培养基中T_3的消耗
    3.4 MEHP处理干扰HTR-8 细胞甲状腺激素代谢酶(DIO2、DIO3)的mRNA表达和蛋白水平
    3.5 MEHP处理下调HTR-8 细胞甲状腺激素受体(TRα、TRβ)的m RNA表达和蛋白水平
    3.6 共培养后,神经干细胞向神经元方向分化减少,向星形胶质细胞方向分化增多
        3.6.1 ReNcell-CX细胞的培养和鉴定
        3.6.2 共培养后,神经干细胞向神经元方向分化减少
        3.6.3 共培养后,神经干细胞向星形胶质细胞方向分化增多
4 讨论
5 结论
6 参考文献
附录
致谢
综述 邻苯二甲酸酯对生殖系统的毒性研究进展
    参考文献

(2)梓醇延迟给药对局灶性永久性脑缺血大鼠的效应及促神经新生作用研究(论文提纲范文)

摘要
Abstract
前言
第1章 梓醇延迟给药对局灶性脑缺血大鼠神经行为学影响
    引言
    1.1 实验材料
        1.1.1 实验主要试剂
        1.1.2 实验主要仪器
        1.1.3 主要试剂配制
    1.2 实验方法
        1.2.1 实验动物
        1.2.2 电凝法制备局灶性永久性脑缺血模型
        1.2.3 药物干预
        1.2.4 模型纳入标准
        1.2.5 神经行为学评分
        1.2.6 数据分析
    1.3 实验结果
        1.3.1 电凝法制备局灶性脑缺血模型
        1.3.2 脑缺血损伤模型大鼠神经功能缺失
        1.3.3 梓醇延迟给药对脑缺血大鼠体重的影响
        1.3.4 梓醇延迟给药对脑缺血大鼠Bederson评分的影响
        1.3.5 梓醇延迟给药对脑缺血大鼠肌力的影响
        1.3.6 梓醇延迟给药对脑缺血大鼠mNSS评分的影响
    1.4 讨论
    1.5 结论
第2章 梓醇延迟给药对局灶性脑缺血大鼠缺血侧脑区神经干细胞分化作用研究
    引言
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验主要试剂与材料
        2.1.2 实验主要仪器
        2.1.3 主要试剂的配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 实验动物
        2.2.2 动物分组及药物干预
        2.2.3 BrdU体内标记
        2.2.4 脑组织取材
        2.2.5 脑组织冰冻切片
        2.2.6 免疫荧光染色
        2.2.7 Western Blot检测相关蛋白表达
        2.2.8 免疫荧光染色图像采集与量化分析
        2.2.9 数据处理
    2.3 实验结果
        2.3.1 梓醇对脑缺血大鼠SVZ区神经干细胞的影响
        2.3.2 梓醇对脑缺血大鼠SVZ区未成熟神经元的影响
        2.3.3 梓醇对脑缺血大鼠缺血周围区成熟神经元的影响
        2.3.4 梓醇对脑缺血大鼠缺血周围区星形胶质细胞的影响
    2.4 讨论
    2.5 结论
第3章 梓醇对离体神经干细胞分化作用研究
    引言
    3.1 实验材料
        3.1.1 主要实验试剂及材料
        3.1.2 实验主要仪器
        3.1.3 主要试剂配制
    3.2 实验方法
        3.2.1 神经干细胞的分离培养
        3.2.2 神经干细胞的传代培养
        3.2.3 免疫荧光鉴定NSCs
        3.2.4 免疫荧光鉴定NSCs增殖
        3.2.5 cck-8 检测NSCs细胞活力
        3.2.6 免疫荧光检测细胞分化
        3.2.7 WB检测细胞分化相关蛋白表达
        3.2.8 数据分析
    3.3 实验结果
        3.3.1 细胞形态观察
        3.3.2 神经干细胞鉴定
        3.3.3 神经干细胞增殖能力测定
        3.3.4 神经干细胞分化能力测定
        3.3.5 梓醇对神经干细胞细胞活力影响
        3.3.6 梓醇对神经干细胞分化作用影响
    3.4 讨论
    3.5 结论
全文总结
创新点及意义
思考与展望
参考文献
文献综述 神经干细胞移植治疗中枢神经系统疾病的研究现状
    参考文献
硕士学位期间科研工作汇报
致谢
附:中英文缩略名词对照表

(3)miR-221在人乳牙牙髓干细胞神经分化过程中的作用及机制研究(论文提纲范文)

摘要
abstract
中英文缩略词表
第1章 引言
    1.1 人乳牙牙髓干细胞
    1.2 人乳牙牙髓干细胞在神经疾病中的应用
    1.3 miRNA在神经疾病发生的作用
    1.4 miRNA调控神经增殖与分化
    1.5 Wnt/β-catenin信号通路调控神经增殖与分化
第2章 miRNA-221 在人乳牙牙髓干细胞神经分化过程中的表达模式及作用
    2.1 材料与方法
        2.1.1 实验材料、实验试剂及相关试剂配制
        2.1.2 主要实验方法
    2.2 实验结果
        2.2.1 人乳牙牙髓干细胞的形态观察及鉴定
        2.2.2 人乳牙牙髓干细胞体外神经元分化体系的建立
        2.2.3 miR-221 在人乳牙牙髓干细胞神经分化过程中的表达规律
        2.2.4 miR-221 促进人乳牙牙髓干细胞神经分化效率
    2.3 讨论
第3章 miRNA-221 的靶基因确定
    3.1 材料与方法
        3.1.1 实验材料、实验试剂及相关试剂配制
        3.1.2 主要实验方法
    3.2 结果
        3.2.1 生物信息学分析预测miR-221 的靶基因是CHD8
        3.2.2 双荧光素酶报告基因分析验证miR-221 的靶基因是CHD8
        3.2.3 miR-221 抑制人乳牙牙髓干细胞CHD8 的表达
        3.2.4 CHD8 在人乳牙牙髓干细胞神经分化过程中表达下调
    3.3 讨论
第4章 miRNA-221 调控人乳牙牙髓干细胞Wnt/β-catenin通路的分子机制
    4.1 材料与方法
        4.1.1 实验材料、实验试剂及相关试剂配制
        4.1.2 主要实验方法
    4.2 实验结果
        4.2.1 人乳牙牙髓干细胞神经分化过程中Wnt/β-catenin通路特征蛋白表达上调
        4.2.2 miR-221 通过抑制CHD8 激活人乳牙牙髓干细胞的Wnt/β-catenin通路
        4.2.3 miR-221 通过激活Wnt/β-catenin通路提高人乳牙牙髓干细胞神经分化效率
    4.3 讨论
第5章 miRNA-221 通过抑制CHD8 激活Wnt/β-catenin通路促进人乳牙牙髓干细胞神经分化
    5.1 材料与方法
        5.1.1 实验材料、实验试剂及相关试剂配制
        5.1.2 主要实验方法
    5.2 结果
        5.2.1 miR-221 通过抑制CHD8 促进人乳牙牙髓干细胞增殖
        5.2.2 miR-221 通过CHD8 促进人乳牙牙髓干细胞周期由G0/G1向S期转变
        5.2.3 miR-221 通过抑制CHD8 抑制人乳牙牙髓干细胞凋亡
        5.2.4 miR-221 通过抑制CHD8 促进人乳牙牙髓干细胞神经分化效率
        5.2.5 CHD8 通过Wnt/β-catenin通路调控人乳牙牙髓干细胞神经分化
    5.3 讨论
第6章 讨论和结论
    6.1 讨论
    6.2 结论
致谢
参考文献
攻读博士学位期间的研究成果
综述 人乳牙牙髓干细胞的研究进展及其调控机制
    参考文献

(4)脑脊液对人脐带间充质干细胞源性的神经干细胞增殖与分化的影响(论文提纲范文)

中文摘要
英文摘要
前言
1.材料和方法
2.实验方法
3.统计学分析
4.结果
5.讨论
6.总结
7.结论
参考文献
文献综述 脑脊液对不同来源的神经干细胞分化的影响
    参考文献
缩略语表
攻读学位期间发表文章情况
个人简历
致谢

(5)干细胞移植数量和时间点对脑卒中治疗效果的初步探索(论文提纲范文)

摘要
Abstract
缩略语索引
第一章 绪论
    1.1 研究背景
    1.2 临床前移植方案和临床移植方案异同及实验方案选择
        1.2.1 脑卒中模型制备的差异及选择
        1.2.2 脑卒中的移植物的选择
    1.3 血管化移植物的移植
第二章 移植细胞的分化与培养
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞系
        2.1.2 实验仪器
        2.1.3 实验抗体
        2.1.4 耗材
        2.1.5 实验试剂
        2.1.6 实验所用溶液及培养基的配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse Embryonic Fibroblasts,MEF)复苏
        2.2.2 小鼠胚胎成纤维细胞传代
        2.2.3 小鼠胚胎成纤维细胞冻存
        2.2.4 饲养层的制备
        2.2.5 饲养层上传统胚胎干细胞(Embryonic stemcell,ESC)的复苏
        2.2.6 饲养层上传统胚胎干细胞的传代
        2.2.7 饲养层上传统胚胎干细胞的冻存
        2.2.8 饲养层胚胎干细胞培养向AIC体系胚胎干细胞过渡
        2.2.9 AIC体系胚胎干细胞悬浮培养
        2.2.10 由胚胎干细胞诱导分化得到神经干细胞
        2.2.11 神经干细胞的传代
        2.2.12 神经干细胞的冻存
        2.2.13 神经干细胞的复苏
        2.2.14 间充质干细胞的复苏
        2.2.15 间充质干细胞的传代
        2.2.16 间充质干细胞扩大培养
        2.2.17 二维内皮细胞分化
        2.2.18 三维内皮细胞分化
        2.2.19 内皮细胞传代
        2.2.20 内皮细胞冻存
        2.2.21 内皮细胞复苏
        2.2.22 成管实验
        2.2.23 内皮细胞神经干细胞混合培养
        2.2.24 成脂肪细胞分化
        2.2.25 成骨细胞分化
        2.2.26 成软骨细胞分化
        2.2.27 免疫荧光染色步骤
        2.2.28 免疫荧光拍照
    2.3 实验结果
        2.3.1 胚胎干细胞多能性鉴定
        2.3.2 神经干细胞的分化和鉴定
        2.3.3 间充质干细胞培养和鉴定
        2.3.4 内皮细胞分化和鉴定
    2.4 本章小结
第三章 脑卒中大鼠的治疗
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验动物
        3.1.2 实验仪器
        3.1.3 实验试剂
        3.1.4 实验所需溶液配制
    3.2 实验方法
        3.2.1 实验行为学评估标准
        3.2.2 构建右侧大脑中动脉栓塞永久梗死模型
        3.2.3 脑卒中后脑的取材方法
        3.2.4 TTC染色
        3.2.5 台盼蓝染色
        3.2.6 给药浓度换算
        3.2.7 大鼠颅内原位移植
        3.2.8 大鼠尾静脉注射
        3.2.9 干细胞移植的临床和实验室方案
        3.2.10 实验分组及治疗方案
        3.2.11 数据统计学处理
    3.3 实验结果
        3.3.1 脑卒中模型的建立
        3.3.2 移植细胞量不足可能是临床疗效不明显的原因
        3.3.3 移植时间点可能直接对临床疗效影响不显着
    3.4 本章小结
第四章 血管化神经干细胞球的培养
    4.1 实验材料
    4.2 实验方法
        4.2.1 内皮细胞神经干细胞混合培养
        4.2.2 血管化神经干细胞球透明化
    4.3 实验结果
        4.3.1 后遗症期的大鼠模型存在器质性损伤
        4.3.2 血管化神经干细胞球的培养与透明化观察
    4.4 本章小结
第五章 结论与讨论
第六章 展望与挑战
致谢
参考文献
附录A 攻读硕士期间发表论文目录

(6)人少突胶质前体细胞冻存体系的优化研究(论文提纲范文)

摘要
ABSTRACT
前言
第一章 实验材料与方法
    1.1 实验材料
    1.2 实验方法
    1.3 实验分组
第二章 实验结果
    2.1 人OPCs培养及鉴定
    2.2 人OPCs冻存复苏效果探究
        2.2.1 细胞收集方式对人少突胶质前体冻存前细胞活率影响
        2.2.2 冻存密度对人少突胶质前体细胞冻存复苏活率影响
        2.2.3 冻存液种类对少突胶质前体细胞冻存复苏活率影响
        2.2.4 降温方式对人少突胶质前体细胞冻存复苏活率影响
        2.2.5 储存时间对人少突胶质前体细胞冻存复苏活率影响
    2.3 人OPCs冻存复苏对细胞特性功能影响探究
        2.3.1 正常及复苏培养人OPCs标记物鉴定对比
        2.3.2 正常及复苏培养人OPCs增殖能力对比
        2.3.3 正常及复苏培养人OPCs迁移能力对比
        2.3.4 正常及复苏培养人OPCs基因表达对比
        2.3.5 复苏后培养人OPCs体外分化潜能实验
第三章 讨论
结论
参考文献
综述: 不同来源人神经干细胞冻存系统研究进展
    参考文献
中英文对照缩略词表
硕士期间发表论文
致谢

(7)淫羊藿素调控人脐带间充质干细胞的凋亡及线粒体自噬的机理研究(论文提纲范文)

摘要
Abstract
引言
第一部分 研究背景
    一、补肾中药调控干细胞的相关研究
        1. 淫羊藿对干细胞的调控
        2. 其他补肾中药对干细胞的调控
    二、HGF在干细胞领域的研究进展
        1. HGF的概述
        2. HGF对干细胞的影响
    三、线粒体自噬的研究进展
        1. 线粒体自噬的概述
        2. 中药调控线粒体自噬
第二部分 淫羊藿素通过HGF/c-Met通路增强人脐带间充质干细胞抗凋亡能力的实验研究
    一、实验材料
        1. 实验细胞
        2. 实验仪器
        3. 实验试剂与耗材
        4. 主要试剂的配制
    二、实验方法
        1. 细胞培养
        2. MTS法测细胞活力
        3. CCK8法测细胞活力
        4. BrdU掺入试验测细胞增殖率
        5. 流式细胞仪检测细胞凋亡
        6. western blot(化学)方法检测蛋白表达
        7. qRT-PCR检测mRNA表达水平
        8. 质粒提取与细胞转染
        9. ELISA法测蛋白表达
        10. 统计学方法
    三、实验结果
        1. 淫羊藿素促进人脐带间充质干细胞的细胞活力与增殖活性
        2. HGF/c-Met通路在人脐带间充质干细胞中具有抗凋亡作用
        3. 淫羊藿素通过HGF/c-Met通路抑制人脐带间充质干细胞凋亡
    四、讨论
第三部分 淫羊藿素调控人脐带间充质干细胞线粒体自噬的实验研究
    一、实验材料
    二、实验方法
        1. MTS法测细胞活力
        2. western blot(荧光)方法检测蛋白表达
        3. qRT-PCR检测mRNA表达水平
        4. MitoTracker与目标蛋白共标记进行免疫荧光显微镜检测
        5. 线粒体膜电位检测(JC-1)
        6. 电镜检测
        7. 统计学方法
    三、实验结果
        1. 自噬抑制剂3-MA对无血清培养人脐带间充质干细胞的影响
        2. 淫羊藿素增加无血清培养人脐带间充质干细胞的线粒体蛋白
        3. 淫羊藿素抑制无血清培养人脐带间充质干细胞的线粒体自噬
        4. 淫羊藿素提高无血清培养人脐带间充质干细胞的线粒体膜电位
    四、讨论
第四部分 淫羊藿素预处理人脐带间充质干细胞蛋白质组学分析
    一、实验材料
    二、实验方法
    三、实验结果
        1. 蛋白浓度测定结果
        2. 差异蛋白筛选结果
        3. 生物信息学分析
    四、讨论
结语
参考文献
附录
在校期间发表论文情况
致谢
附件

(8)黄芪多糖调控脱髓鞘小鼠髓鞘再生及神经干细胞定向分化的作用机制研究(论文提纲范文)

缩略词表
中文摘要
Abstract
引言
第一章 黄芪多糖对脱髓鞘小鼠神经功能障碍及髓鞘再生的影响
    1 实验材料
        1.1 实验动物
        1.2 实验试剂
        1.3 实验仪器
    2 实验方法
        2.1 脱髓鞘小鼠模型的建立及分组
        2.2 给药方案
        2.3 体重监测
        2.4 爬杆试验
        2.5 平衡木行走试验
        2.6 取材及制备石蜡切片
        2.7 LFB染色
        2.8 统计分析
    3 实验结果
        3.1 脱髓鞘小鼠模型的建立
        3.2 APS可以缓解脱髓鞘小鼠的神经功能障碍,并促进髓鞘再生
    4 讨论
第二章 黄芪多糖对脱髓鞘小鼠神经干细胞定向分化的影响
    1 实验材料
        1.1 实验动物
        1.2 实验试剂
        1.3 实验仪器
    2 实验方法
        2.1 脱髓鞘小鼠模型的建立及分组
        2.2 给药方案
        2.3 取材
        2.4 Real-time PCR
        2.5 Western blot
        2.6 免疫组织化学染色
        2.7 统计分析
    3 实验结果
        3.1 脱髓鞘小鼠体内的神经干细胞定向分化情况
        3.2 APS 在体内可以抑制神经干细胞的干性维持
        3.3 APS 在体内可以抑制神经干细胞向星形胶质细胞的定向分化
        3.4 APS 在体内可以促进神经干细胞向少突胶质细胞的定向分化
        3.5 APS 在体内可以促进神经干细胞向神经元的定向分化
    4 讨论
第三章 黄芪多糖对体外培养的C17.2 神经干细胞定向分化的影响
    1 实验材料
        1.1 细胞株
        1.2 实验试剂
        1.3 实验仪器
    2 实验方法
        2.1 细胞培养
        2.2 细胞分组给药
        2.3 细胞免疫荧光染色
        2.4 Real-time PCR
        2.5 Western blot
        2.6 统计分析
    3 实验结果
        3.1 C17.2 神经干细胞体外培养体系及分化模型的建立
        3.2 APS 在体外可以抑制 C17.2 神经干细胞的干性维持
        3.3 APS 在体外可以抑制 C17.2 神经干细胞向星形胶质细胞的定向分化
        3.4 APS 在体外可以促进 C17.2 神经干细胞向少突胶质细胞的定向分化
        3.5 APS 在体外可以促进 C17.2 神经干细胞向神经元的定向分化
    4 讨论
第四章 黄芪多糖对神经干细胞中Sonic hedgehog信号通路的影响
    1 实验材料
        1.1 实验动物
        1.2 细胞株
        1.3 实验试剂
        1.4 实验仪器
    2 实验方法
        2.1 脱髓鞘小鼠模型的建立及分组
        2.2 给药方案
        2.3 取材
        2.4 细胞培养
        2.5 细胞分组给药
        2.6 Real-time PCR
        2.7 Western blot
        2.8 统计分析
    3 实验结果
        3.1 APS 在体内可以促进 Sonic hedgehog 信号通路的激活
        3.2 APS 在体外可以促进 Sonic hedgehog 信号通路的激活
    4 讨论
创新点
结论
致谢
参考文献
附录
    附录一
    附录二
在校期间发表学术论文情况
在校期间参加学术会议情况

(9)过表达脑源性神经营养因子的神经干细胞移植治疗大鼠放射性认知功能障碍的研究(论文提纲范文)

中文摘要
Abstract
序言
    参考文献
第一部分 胎鼠神经干细胞的分离培养、慢病毒感染以及移植前的鉴定
    研究背景及目的
    材料与方法
    结果
    讨论
    参考文献
第二部分 神经干细胞移植后迁移、分化以及向神经环路整合情况的研究
    研究背景及目的
    材料与方法
    结果
    讨论
    参考文献
第三部分 神经干细胞移植后大鼠认知功能及海马微环境变化情况的研究
    研究背景及目的
    材料与方法
    结果
    讨论
    参考文献
结论
综述
    参考文献
中英文缩略词对照表
攻读博士学位期间科研经历及发表的论文
致谢

(10)CO预处理神经干细胞在出血性脑卒中的作用及机制研究(论文提纲范文)

摘要
ABSTRACT
英文缩写词表
绪论
第一部分 铁过载对神经干细胞的损伤
    1.1 引言
    1.2 材料与方法
    1.3 结果
    1.4 讨论
    1.5 结论
第二部分 一氧化碳对神经干细胞铁过载损伤的保护及其机制
    2.1 引言
    2.2 材料与方法
    2.3 结果
    2.4 讨论
    2.5 结论
第三部分 一氧化碳预处理神经干细胞促进了出血性卒中鼠的神经功能的恢复
    3.1 引言
    3.2 材料与方法
    3.3 结果
    3.4 讨论
    3.5 结论
全文总结
研究展望
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的论文

四、胎牛血清对人胚胎神经干细胞分化的影响(论文参考文献)

  • [1]MEHP处理胎盘滋养层细胞对共培养神经干细胞分化的影响[D]. 李荣. 安徽医科大学, 2021(01)
  • [2]梓醇延迟给药对局灶性永久性脑缺血大鼠的效应及促神经新生作用研究[D]. 邵亚丽. 西南大学, 2020(05)
  • [3]miR-221在人乳牙牙髓干细胞神经分化过程中的作用及机制研究[D]. 文冰. 南昌大学, 2020
  • [4]脑脊液对人脐带间充质干细胞源性的神经干细胞增殖与分化的影响[D]. 米尼德日玛. 内蒙古医科大学, 2020(03)
  • [5]干细胞移植数量和时间点对脑卒中治疗效果的初步探索[D]. 朱庆元. 昆明理工大学, 2020(05)
  • [6]人少突胶质前体细胞冻存体系的优化研究[D]. 刘畅. 南方医科大学, 2020(01)
  • [7]淫羊藿素调控人脐带间充质干细胞的凋亡及线粒体自噬的机理研究[D]. 王璐. 广州中医药大学, 2019(08)
  • [8]黄芪多糖调控脱髓鞘小鼠髓鞘再生及神经干细胞定向分化的作用机制研究[D]. 叶妮. 上海中医药大学, 2019(01)
  • [9]过表达脑源性神经营养因子的神经干细胞移植治疗大鼠放射性认知功能障碍的研究[D]. 张奇贤. 苏州大学, 2019(04)
  • [10]CO预处理神经干细胞在出血性脑卒中的作用及机制研究[D]. 谢正兴. 上海交通大学, 2017(05)

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胎牛血清对人胚胎神经干细胞分化的影响
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