一、以研究成保持干细胞活性的新方法（论文文献综述）
张婷婷[1]（2021）在《FGD5维持乳腺发育以及促进基底样乳腺癌发生发展的作用及机制研究》文中研究表明基底样乳腺癌（Basal-like breast cancer,BLBC）是约占乳腺癌（Breast cancer,BC）的15-20%,是高度侵袭性恶性肿瘤。该亚型作为危害女性健康最主要的恶性疾病,具有复发率高,缺乏靶向疗法且预后最差等特征。因此,寻找和探索针对BLBC有效的靶向疗法迫在眉睫。乳腺成体干细胞（MaSCs）是一群高度动态化的细胞群,具备促进青春期乳腺导管的生成和妊娠期乳腺导管的重塑等生理功能。同时,有研究证明该类细胞可以在恶性转化后诱导乳腺肿瘤发生。肿瘤起始细胞（TICs）也称肿瘤干细胞（CSCs）,拥有与成人组织干细胞相似的干细胞样特性。基于BLBC与其它亚型相比拥有更高百分比的TICs,靶向TICs有望成为有效抑制BLBC的新策略和新方法。但是MaSCs和CSCs之间可能共享的调控机制,以及参与BLBC干细胞性状维持进而促进乳腺癌发生发展的关键靶点及具体分子机制尚不清楚。一项乳腺癌基因组数据库分析研究显示Rho guanine nucleotide exchange factor（GEF）家族成员--FGD5（Faciogenital Dysplasia 5）的拷贝数扩增是乳腺癌的驱动因素和潜在治疗靶点。然而,FGD5对正常乳腺发育及BC起始和疾病进展中的作用及机制尚不明确。在本课题研究中,我们检测小鼠乳腺不同细胞群体Fgd5的蛋白及转录水平发现其在富含MaSCs细胞群中富集。乳腺上皮细胞（Mammary epithelial cells,MECs）特异性敲除FGD5导致乳腺发育期间导管形态发育延缓,干细胞数量及活性显着降低,乳腺重构能力减弱。Fgd5-Cre-ERT2;tdTomato报告小鼠谱系示踪（Genetic lineage tracing）实验揭示Fgd5阳性细胞具有产生基底（Basal MECs）和管腔（Luminal MECs）上皮细胞的MaSCs能力。敲除FGD5通过降低自发三阴性乳腺癌小鼠肿瘤起始细胞的数量和自我更新能力延缓该模型小鼠疾病的发生和发展。同时,FGD5缺失抑制BLBC细胞的增殖活性、侵袭和成球能力。机制上,FGD5与表皮生长因子受体（Epidermal growth factor receptor,EGFR）结合并干扰 E3 连接酶 ITCH 介导的 EGFR泛素化和降解,从而增强BLBC细胞增殖活性、侵袭能力和干性能力,同时增加BLBC的耐药性。基于FGD5-EGFR相互作用结构域筛选的一段打断该相互作用的细胞穿膜肽PER3通过促进BLBC细胞中EGFR泛素化和降解降低EGFR的表达。在体内和体外,多肽PER3具有较好的抑制基底样乳腺癌疾病进展的药效活性,并且联合化疗药增加耐药株的化疗敏感性。本课题探究FGD5调节正常乳腺发育以及乳腺癌发生发展的作用和调节机制,发现FGD5作为乳腺干细胞的标志物影响正常乳腺的发育。在BLBC中FGD5调控EGFR蛋白表达,维持乳腺癌CSCs特征,促进BLBC的发生发展。靶向FGD5研发促进EGFR降解的新多肽先导化合物抑制基底样乳腺癌疾病进程,为BLBC的靶标发现及诊治提供新策略。该研究首次证明FGD5是维持正常乳腺干细胞和肿瘤起始细胞功能的活性蛋白,为该复发难治性乳腺癌亚型的有效治疗方案提供经验。
张宪明[2]（2021）在《细胞光遗传学操控与同步传感检测的技术开发与应用研究》文中指出光遗传学是一种结合了多个学科的新兴技术,通过使目标细胞表达特定的光敏感蛋白,可以让原本不具有光敏特性的细胞获得对光信号的响应能力。通过光遗传学方法可实现对细胞内信号通路的精准调控,并诱发相应的生理活动。该技术具有精准、快速、可逆等优点,可以帮助我们更好的了解与利用细胞的生命活动。RTCA（Real-Time Cell Analysis,实时细胞分析）系统是结合了ECIS（Electric Cell-substrate Impedance Sensing,电子细胞基质阻抗判断）系统与MEA（Microelectrode Arrays,多电极阵列）系统的商业化传感器阵列,能够实时记录细胞的阻抗与电位变化,被广泛应用于药物筛选和细胞毒性的研究。传统药物筛选研究中往往需要针对细胞特异性靶点测试小分子化合物,面临成本高昂、流程复杂、重复性差等问题,本论文研究拟建立一种能将细胞功能快速特异性调控与实时检测分析相结合的方法,即将光遗传学技术与RTCA技术联用,从而提升传统药物筛选的效率与稳定性。本研究通过光遗传学方法激活细胞内特定信号通路,来诱导肿瘤细胞凋亡与上皮间质转化（EMT）的发生,并用RTCA系统记录这些生理过程中细胞阻抗的变化情况。研究证明了将光遗传学方法与RTCA系统结合来对细胞生命过程实施操控与同步分析的可行性,基于此发明了一种结合了光遗传学与RTCA系统封的药物筛选方法,并在疾病相关的药物评价分析实验中得到了良好的应用。论文的主要研究工作总结如下:1)通过对本实验室已有的LED阵列进行改造,使其功能更加稳定,同时更加适合与RTCA系统结合进行光遗传学实验。研究表明经过改造后的LED阵列在长时程细胞光遗传学实验中的可靠性,并建立了光控LED阵列与RTCA相结合的系统,提出了一种可用于高通量药物筛选与评价分析的新方法。2)研究首先证明了RTCA系统可以准确的记录与分析顺铂与Opto-Bax光控体系所诱导的HEK-293T细胞凋亡过程中细胞阻抗的变化情况。其次,利用RTCA系统记录了两种不同凋亡抑制剂对光控Opto-Bax诱导的细胞凋亡的抑制效果,证明了本研究所建立的将光遗传学技术与RTCA结合的新技术手段能用于针对细胞线粒体凋亡抑制剂的筛选与评价的研究。3)研究证明了RTCA系统可以准确的记录与分析TGF-β与Opto-PI3K光控元件所诱导的A549肺癌细胞EMT过程中的阻抗变化情况,并建立了一种有效的阻抗数据的处理方法。研究发现TGF-β和Opto-PI3K所诱导的EMT过程的细胞阻抗表现形式存在差异,而添加PI3K通路的抑制剂能有效改变由Opto-PI3K诱导EMT发产生的阻抗的变化。因此,本研究表明将光遗传学技术与RTCA结合的新方法能用于肿瘤EMT过程中相关抑制剂的高通量筛选。
牛宝华[3]（2021）在《调控Wnt和Activin/Nodal信号高效建立和悬浮扩增人多能干细胞》文中进行了进一步梳理多能干细胞（pluripotent stem cells,PSCs）包括胚胎干细胞和诱导多能干细胞。由于PSCs具有无限增殖和分化成不同三胚层细胞的能力,使得它在研究胚胎或器官发育、疾病模型构建、细胞治疗、药物研发及毒性测试等方面具有重要的应用价值。而目前在多能干细胞应用过程中,干细胞的数量和质量控制方面存在问题。解决多能干细胞应用过程中的阻碍需要有一个稳定的培养体系作为支撑,从而可以在体外生产大量、高质量的人PSCs。虽然目前有很多体系用于人PSCs的培养,比如:MEF-CM、KSR/bFGF、m Te SR、E8、NHSM、5i LAF、t2i LGǒ、LCDM等等。然而不同培养体系以及这些体系下培养的细胞,在不同程度上存在些问题。第一,体系成分复杂且存在异源蛋白,制约了临床转化应用;第二,体系不支持单细胞传代,或者单细胞传代时细胞存活率低,导致培养低效,不利于基因编辑和单细胞克隆的筛选,从而限制多能干细胞的应用;第三,干细胞在培养过程中产生自发分化,影响了细胞的质量;第四,部分体系会导致多能干细胞的基因组不稳定,遗传印记丢失,给其应用带来安全隐患;第五,体系不支持规模化的扩增或者在进行规模化扩增时产量低,难以满足细胞应用时的数量要求。第六,部分体系对多能干细胞的兼容性差。这些问题极大地限制了PSCs的应用。建立新的培养体系对于多能干细胞的高质量生产、高效建立和大规模扩增具有重要意义,可以推动多能干细胞的应用。现研究表明多能干细胞的自我更新和多向分化潜能受到不同的信号通路调节。比如,啮齿类和灵长类胚胎发育过程中,Wnt信号通路控制细胞命运决定和组织形态发生,调控多能干细胞的增殖或分化。Activin/Nodal信号通路,在灵长类的胚胎发育中可以直接调控多能性转录因子Nanog等的表达,而且在人的多能干细胞中也可以维持干细胞的自我更新和促进其增殖,因此该信号无论在体内还是体外对人的多能性维持有着重要作用。总的来说,Wnt和Activin/Nodal信号通路在调控人干细胞的多能性中起着重要作用,然而Wnt和Activin/Nodal信号能否被精确调控以协同维持多能干细胞的自我更新还不清楚。在本研究中,我们利用可以调控Wnt和Activin/Nodal这两个信号通路的小分子和生长因子的不同浓度组合,去筛选新的多能干细胞培养体系。最终我们筛选得到一个新的多能干细胞培养体系,命名为AIC体系（10ng/ml Activin-A,2μM IWP2和0.6μM CHIR）。该体系成分明确且无异源成分,利于临床转化应用。该体系可以协同调控Wnt和Activin/Nodal信号通路来维持多能干细胞的自我更新。AIC体系支持从囊胚或者以体细胞重编程方式直接建立新的干细胞系,在建立新干细胞系的效率上比现在常用体系的建系效率更高,同时也支持现有干细胞系转换到AIC培养体系。而且,AIC体系可以支持饲养层、无饲养层（基质胶:Matrigel,玻连蛋白等）和悬浮三种培养模式,满足不同的实验需求。同时,AIC体系还支持高效的悬浮扩增,4天可以增殖25倍左右,为干细胞的大规模培养奠定了一定的基础;AIC体系培养的多能干细胞的活力好、单细胞克隆效率高（>90%）,利于基因编辑等操作应用;AIC体系培养的细胞均一性高,无自发分化,提高了细胞质量。AIC体系下长期培养的干细胞保持了基因组的稳定性,保证其安全性;同时AIC体系,对不同的干细胞系兼容性很好,可以维持不同的干细胞系的多能性。我们还初步探索了Wnt和Activin/Nodal信号通路对干细胞多能性的维持机制。总之,通过调控Wnt和Activin/Nodal信号建立的AIC体系可以解决现有多能干细胞培养体系存在的问题,进而解决多能干细胞应用过程中对细胞质量和数量的要求,有利于建立GMP级的干细胞,为多能性干细胞的临床转化与应用奠定基础。
孙凯[4]（2020）在《仿生液晶态氧化石墨烯/多糖复合体系的构建及其对hBMSCs生物学行为的影响》文中研究表明本研究核心创新思路是模拟细胞外基质（ECM）的类液晶态结构,以氧化石墨烯（GO）液晶（LCs）作为液晶态元,以透明质酸（HA）/海藻酸（SA）为基质,分别制备了GO/HA和GO/SA二元复合液晶体系。研究结果发现,GO液晶与透明质酸和海藻酸构建的液晶体系,可以显着降低GO液晶的临界浓度（约降低10倍）,且此类液晶体系具有长程取向结构（纯GO液晶内部多个液晶畴存在是短程取向）。本研究的核心技术是采用冷冻干燥和Sr2+、Mn2+、Ca2+的交联改性技术构建了二元液晶体系的3D支架,不仅保持了液晶态的长程取向和多孔互串互通结构,还显着增强了支架材料的力学强度（压缩强度提高了约5倍）,即使GO含量极低时仍具有优异的力学性能。本研究的体内外实验结果表明:Ca2+或Sr2+交联的液晶态支架和自组装液晶态纤维膜均有利于人骨髓间充质干细（h BMSCs）粘附、铺展、增殖和成骨分化,具有明显的促颅骨缺损修复活性。本研究开发了一种结构和性能优异的支架材料的制备新方法,具有较好的应用前景。基于GO/HA液晶体系制备液晶态细胞培养基,模拟细胞在体内液晶态的生长环境,h BMSCs细胞的增殖实验显示培养基生物相容性良好,有利于细胞生长,为细胞培养开辟了一种新体系。
陶白龙[5]（2020）在《兼具促成骨及抗菌性能钛基植入体表面改性及其生物学评价》文中提出医用钛合金由于其良好的机械性能、化学稳定性和生物相容性,被广泛地应用于临床牙科和骨科领域。然而,由于钛植入体表面的生物惰性,在一定程度上影响了成骨相关细胞在其表面的粘附、增殖和分化,并阻碍了植入体与周围组织的早期骨整合能力,甚而造成无菌性松动和植入失败。此外,众多研究表明,细菌感染是导致植入物翻修和失败的另一个主要原因。因此,对医用钛合金植入体表面进行改性使其具备优异的骨整合及抗菌性能,已成为骨科领域的研究热点之一。鉴于此,本论文从模拟细胞外基质的角度为出发点,利用层层自组装技术、阳极氧化技术以及阴极电沉积技术,发展了一系列在医用钛植入体表面构建新型生物活性涂层的策略,在赋予钛植入体优异的骨整合性能的同时,还兼具良好的抑制细菌感染的能力,可望有效地提高钛植入体的长期使用寿命。主要研究内容和结论如下:1.N-Cl改性壳聚糖多层结构表面修饰钛基材及细菌抑制的研究为提高钛基材的抑菌性能,我们采用层层自组装技术（Layer-by-layer,LBL）,制备了壳聚糖-1-（羟甲基）-5,5-二甲基己内酰脲（Chi-HDH-Cl）与明胶（Gel）复合的生物活性涂层。傅立叶变换红外光谱（FTIR）、核磁共振（1HNMR）和X射线光电子能谱（XPS）分析结果表明,Chi-HHD-Cl复合物已成功合成。利用扫描电子显微镜（SEM）、原子力显微镜（AFM）和水接触角测量技术,对各组钛材的形貌、粗糙度变化和表面润湿性进行了表征,证实了钛基材上多层膜的成功制备。针对大肠杆菌（E.coli）和金黄色葡萄球菌（S.aureus）的抑菌实验表明,Gel/Chi-HDH-Cl修饰的钛基材可高效地抑制细菌的粘附和生长。同时,体外细胞试验证实,Gel/Chi-HDH-Cl多层膜对成骨细胞无明显的细胞毒性,并且可以促进成骨细胞碱性磷酸酶（ALP）的表达,同时上调成骨细胞相关基因的表达,包括转录因子（Runx2）和碱性磷酸酶（ALP）。该研究为抑菌型钛基材料的制备提供了一种新方法。2.二氧化钛纳米管阵列表面pH响应性多层膜构建及其抑菌/促成骨活性研究为了提高钛基材的抗菌性能和改善细胞相容性,本研究以二氧化钛纳米管（TNTs）加载成骨生长肽（BMP2）,采用层层自组装技术,在其表面构建pH响应性海藻酸二醛-庆大霉素（ADA-Gen）和壳聚糖（Chi）组成的多层膜,得到TNT-BMP2-LBLg样品。利用FTIR证实了ADA-Gen的成功制备。AFM、XPS、表面Zeta电位、圆角椭偏仪、纳米压痕实验证明了多层膜的成功制备。释放实验表明,酸性环境（模拟细菌感染微环境）可触发多层膜中ADA-Gen的降解,进而加速TNTs中BMP2的释放。此外,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抗菌实验证实,TNT-BMP2-LBLg在早期（6 h）和长期（72 h）均具有良好的抗菌能力。体外细胞实验与金黄色葡萄球菌共培养实验结果表明,该涂层具备很好的抗菌效果且对成骨细胞具有良好的细胞相容性。获得的TNT-BMP2-LBLg可以促进成骨细胞的分化,包括增强碱性磷酸酶活性（ALP）、提高矿化能力和刺激成骨相关基因的表达,包括Runx2、ALP、I型胶原（Col I）、骨桥蛋白（OPN）和骨钙蛋白（OCN）。本研究为开发pH响应型抗菌和增强骨整合型钛基植入体提供了新思路。3.钛合金表面氧化石墨烯-Zn2+涂层的构建及其抑菌/促成骨活性的研究利用阴极电泳沉积（EPD）法,在钛材表面制备了甲基丙烯酰基改性氧化石墨烯（GOMA）作为Zn2+储池和释放平台。随后,通过自由基聚合反应,将苯基硼酸（PBA）功能化甲基丙烯酸修饰的明胶（Gel MA-PBA）与GOMA反应制备GO-Zn/Gel MA-PBA涂层。通过AFM及FTIR表征证实GO和GOMA的成功制备。通过SEM、XPS和Zn2+释放实验,证实了GO-Zn/Gel MA-PBA涂层的成功制备。体外细胞实验包括细胞活性、ALP、胶原分泌（Col I）、细胞外基质（ECM）矿化、成骨基因和蛋白质印迹等结果表明:GO-Zn/Gel MA-PBA涂层有利于成骨细胞的粘附、增殖和分化。明胶的存在以及PBA与成骨细胞表面的碳水化合物形成稳定的化学结构有利于成骨细胞在钛材表面的早期粘附,同时缓慢释放的Zn2+可以促进成骨细胞的增殖和分化。此外,对金黄色葡萄球菌（S.aureus）和铜绿假单胞菌（P.aeruginosa）的抗菌实验证实,GO-Zn/Gel MA-PBA涂层具有良好的抗菌能力,有效地抑制了细菌粘附,防止了生物膜的形成。本研究为制备兼具促成骨和抗菌的钛材在骨科临床治疗应用上提供了一个新的策略。4.钛植入体表面ZIF-8@Levo/LBL涂层构筑及细菌抑制/促体内骨形成的研究本研究提出了一种制备具有pH响应的钛种植体抗菌涂层的策略,以响应细菌相关的局部酸性环境。包括以下三个步骤:首先,合成了左氧氟沙星（Levo）负载的沸石咪唑酯骨架结构（ZIF-8@Levo）的纳米颗粒;其次,用EPD方法将纳米颗粒负载到胶原改性的钛基材上;最后,在改性Ti基底上进一步旋转包覆了多层明胶和壳聚糖得到负载ZIF-8@Levo纳米颗粒的样品（MOF@Levo/LBL）。由于凝胶和壳聚糖的螯合作用会降低ZIF-8@Levo的水解作用,从而实现Levo和Zn2+的持续释放。通过透射电镜（TEM）、X-射线衍射（XRD）、FTIR、水动力学尺寸测试以及紫外可见光谱法（UV-vis）测试,表明ZIF-8@Levo纳米颗粒的成功制备。通过SEM证实ZIF-8@Levo纳米颗粒已成功地固定到钛材表面。通过钛材表面pH测试,证明即使在存在细菌的情况下,MOF@Levo/LBL可以维持弱碱性的微环境。通过将MOF@Levo/LBL材料浸泡在不同pH的PBS溶液中,证明ZIF-8@Levo纳米颗粒的降解具有一定程度的pH响应性。通过CCK-8细胞活性检测、乳酸脱氢酶活性（LDH）检测、成骨细胞的活/死染色、成骨细胞骨架染色、ALP染色、天狼星红染色、茜素红染色以及成骨细胞相关基因的表达量等实验,表明制备的MOF@Levo/LBL具有体外促进成骨细胞的粘附、增殖和分化的能力。此外,MOF@Levo/LBL样品对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有较强的抗菌能力,这是由于ZIF-8@Leco纳米颗粒的水解作用,同时导致碱性微环境。用感染股骨的大鼠模型进行体内植入,发现MOF@Levo/LBL植入物不仅能有效抑制细菌粘附,而且能显着改善钛植入物的骨整合。该研究为制备具有较强抗菌能力和增强成骨潜能的多功能钛基植入体提供了一种新方法。
丁召召[6]（2020）在《基于丝蛋白纳米纤维的材料仿生设计及促进组织再生的研究》文中指出组织微环境包含多种调控因素,单一因素调控的仿生材料难以实现损伤组织的功能修复,因此,需要建立多元化的仿生体系,通过多因素的调控促进损伤组织的功能重建。丝蛋白复杂的构象和多级结构使其成为进行多因素可控设计的理想材料平台。以高晶丝蛋白纳米纤维为基本结构单元,本论文首先通过制备工艺的调整,经电场诱导将取向信号引入丝蛋白多孔海绵。通过取向信号成功引导细胞定向增殖和迁移,增强海绵血管化能力,改善创面上皮化水平和胶原沉积,实现创面修复质量的显着提高。与此同时,利用高晶丝蛋白纳米纤维为载体,加载和控释去铁胺,实现化学调控信号的引入,通过对去铁胺的长效控释,改善了内皮细胞和成纤维细胞的生物活性及促血管化相关因子的高效表达,赋予丝蛋白纳米纤维凝胶良好的促血管化能力,改善创面修复的速率和质量,证明了利用高晶丝蛋白纳米纤维实现不同物理和化学信号调控,提高丝蛋白生物材料活性的可行性。随后,以高晶和非晶丝蛋白纳米纤维作为结构单元,利用两种结构单元对不同制备工艺的响应性差异,结合辣根过氧化物酶交联和电场诱导工艺,在同一丝蛋白生物材料中成功实现取向信号和力学信号的相对独立调控,制备出具有取向结构的高强度丝蛋白纳米纤维凝胶。形成了以丝蛋白纳米纤维为结构基元,构建物理和化学多种信号可主动设计的材料制备体系,为多元化仿生微环境的构建提供方法保障。在对基于丝蛋白纳米纤维的材料制备方法进行优化的同时,通过所制备出的具有促血管化能力的丝蛋白海绵和凝胶,研究并阐明了取向信号和去铁胺控释促进体内血管化网络快速形成,提高创面愈合速率,改善创面愈合质量的基本过程,加深了对材料性能和血管化水平相互关系的理解。以具有取向结构的高强度丝蛋白纳米纤维凝胶为基质,通过取向结构和力学信号的协同作用,诱导了体外骨髓间充质干细胞的取向增殖和成骨分化,体内新骨的再生,体现出复合凝胶良好的骨诱导和骨再生能力,提高了骨修复性能的基本规律,为通过多种调控因素的仿生设计不断改善材料骨诱导性,提高缺损骨组织的功能重建提供新的思路,证明了丝蛋白作为生物活性材料改善不同组织修复的普适性。综上所述,以丝蛋白纳米纤维为结构基元,本论文通过不同制备工艺结合,初步建立了制备包含多种调控信号生物材料的方法体系。通过上述体系开发新型丝蛋白生物材料,实现了创面和骨缺损的有效修复,证明了上述体系的技术可行性和普适性,为未来基于不同组织特定需求,进行复杂微环境的个性化设计奠定了基础,提高了丝蛋白生物材料在不同组织修复中的适应性。
刘杨[7]（2020）在《3D打印器件与微流控技术的肿瘤微环境系统生物学分析》文中提出肿瘤基质微环境对肿瘤的形成,转移和重编程至关重要。研究肿瘤和细胞间相互作用的传统方法难以获得定量化的数据或者重心偏向于复杂的微细加工过程而忽略了生物学问题本身。由于在体内研究肿瘤微环境是一个巨大的挑战,而发展可以通过定量剖析肿瘤的迁移、重编程和细胞与细胞的相互作用的数据来再现肿瘤-间质生态位的体外技术是非常必要的。微流控芯片技术的发展虽然能帮助生物学家解决许多生物学问题,但因其复杂的制作过程,高额的加工费用及对周围环境的苛刻要求使得一般实验室很难实施。近些年来随着3D打印技术的飞速发展,尤其是桌面3D打印机精度的不断提高,成本的逐渐下降,使得该技术被越来越多的科研工作者所接受。在本文中,我们利用3D打印的器件结合微流控技术来重构肿瘤微环境从而对其进行一系列研究。主要内容如下:（1）在体内,肿瘤细胞被细胞外基质、脉管系统和宿主间质等邻近的细胞所包围,这也被称为肿瘤微环境。为了了解肿瘤发生,体外定量测量重建肿瘤生态位是非常重要的。鉴于此,我们开发了一种3D打印“积木拼插式”微流控装置,用于肿瘤和成纤维细胞的空间图案化,能够以最小化的微流控技术和标准移液操作的兼容性重现肿瘤微环境。此方法有助于使用少量细胞（少于100个）进行异型共培养,定量表型解码和下游分子检测。基于表型和基因/蛋白质表达的纤维肉瘤细胞与成纤维细胞之间相互作用的分析表明,肿瘤及其对应物主要通过促炎性细胞因子的上调表现出互惠的协同作用。值得注意的是,在整个转录图谱（RNA-seq）中,成纤维细胞显示出从正常到癌相关成纤维细胞（CAF）样阶段的过渡,而肿瘤细胞表现出过度活跃的核糖体生物发生。还开发了小鼠异种移植模型以验证我们的体外分析。由于其易于使用,与分子分析的完全兼容性以及开放源的可访问性,该方法提供了一个体外实验系统,以提高对肿瘤发生和相应的肿瘤微环境的认识。（2）三维肿瘤细胞团块培养相比二维平面细胞培养因其更接近人体内部肿瘤三维生长的真实情况,所以能更好地模拟肿瘤微环境。其同时也是近年来用于肿瘤研究最好的体外模型之一。利用3D打印微流控技术制备了微井阵列式微流控芯片。通过简单的移液操作即可快速得到大量尺寸均一且形状规则的细胞团块,并以细胞团块为基本单位实现了多图案组织的构建。除此之外,利用形成的细胞团块模拟了在肿瘤微环境中肿瘤细胞在细胞外基质和内皮细胞中的侵袭迁移变化。该三维细胞团块的培养方法为组织器官的构建、肿瘤微环境的模拟以及相关生物学机制的研究奠定了基础。
翟锦霞[8]（2020）在《电信号响应性铌酸钾钠基植入材料及其生物学性能研究》文中进行了进一步梳理骨肉瘤是最常见的原发性恶性骨肿瘤,已成为骨外科主要疾病之一。临床中肿瘤切除手术是目前治疗骨肉瘤最常用且最有效的方法,但是肿瘤切除会产生骨缺损,且由于切除不彻底残留的肿瘤细胞极易导致肿瘤复发。骨植入材料的研发和使用对于肿瘤切除术后骨缺损修复具有重要意义,但传统的植入材料忽略了残留肿瘤细胞引起的复发和转移问题,患者植入材料后仍需结合化疗来解决,而化疗药物局限性大、副作用大、特异性差,给患者的身心健康造成了严重的危害。另一方面,缺损处植入材料的表界面感染问题也是肿瘤切除术后主要的并发症之一,植入后一旦发生感染,往往需要注射大量的抗生素进行治疗,严重的将造成患者截肢甚至死亡。因此,为了杀灭残余肿瘤细胞并预防和消除植入材料表界面感染,研发一种兼具抗肿瘤和抗菌功能的植入材料成为肿瘤切除术后大段骨缺损临床治疗的有效途径。人体生物电的发现使得电刺激被广泛应用在临床,如借助电刺激恢复人体的某些收缩功能、治疗巴金森氏病等。研究表明外加电信号可以引起肿瘤细胞膜通透性增强和线粒体膜电位极化等多种病理性变化而杀灭肿瘤细胞,也可通过电解水产生大量活性氧杀灭细菌。此外电信号能调控骨细胞的增殖分化,对具有压电响应性的骨组织修复起到促进作用。但各种施加电信号的外源装置需要额外电源,携带不便和难以植入体内,且植入时易引起周围组织感染等临床问题,限制了其进一步的发展。因此,基于电信号对肿瘤细胞和细菌的杀灭作用,以及骨组织本身的压电特性,本文提出利用具有电信号响应性的压电材料仿生构建内源性电场实现离子输运靶向到细胞和细菌的设想,设计兼具抗肿瘤和抗菌特性的骨植入材料。研究了铜掺杂铌酸钾钠植入材料产生的无源电信号辅助离子输运对抗肿瘤机制、杀菌机制的影响规律,对骨肉瘤外科切除术后肿瘤复发和转移及植入体感染的消除具有重要的科研价值和临床意义,本研究进行了如下的工作:（1）针对骨肉瘤外科切除术后残留肿瘤细胞引起的肿瘤复发与转移及切除术后缺损处植入材料表界面感染的临床问题,提出利用压电植入材料与带电细胞或细菌之间形成的内源性电场传输带电离子靶向到细胞的设想,以实现杀死肿瘤细胞和抑制或消除细菌感染。设计并制备了一种具有电信号响应性的铜掺杂铌酸钾钠植入材料,通过外加电场极化处理的方法构建内源性电场。体外细胞生物学实验初步表明,内源性电场作用可以促进骨髓间充质干细胞的增殖分化和细胞的铺展,表明压电植入材料具有良好的生物相容性。同时一方面内源性电场大小也直接影响了骨肉瘤细胞代谢行为,其中高强度电场对骨肉瘤细胞的杀灭作用最明显,细胞存活率仅有16%。具体表现为高强度内源性电场作用下细胞膜电位去极化增强膜通透性,溶液中铜离子进入到胞内引起线粒体膜电位去极化从而促进细胞凋亡。另一方面具有低、中、高表面电势的压电植入材料与细菌细胞膜形成低、中、高强度的内源性电场。首先采用平板菌落计数法验证了高表面电势的植入材料对细菌的杀灭效果最好,抗菌率可达到100%。进而通过测定细菌内部的离子量,表明高强度电场作用下离子输运靶向到细菌的离子量最多,比低强度电场传输靶向到细菌离子量增加约140%。该研究工作的设计的极化压电植入材料与带电生命体之间形成的内源性电场为临床上设计兼具抗肿瘤和抗菌的骨植入材料提供了一种新的途径。（2）基于压电粒子可以响应外界超声刺激产生电信号的特性,进一步提出构建高强度纳米电场的设想,实现远程遥控杀死肿瘤细胞。固相烧结法结合水热处理技术制备出具有电信号响应性的铜掺杂铌酸钾钠压电粒子,采用个性化设计的模具在外加电场条件下对压电粒子进行极化处理,并通过数字信号放大器采集超声刺激下压电粒子输出的电信号,结果表明极化后的压电粒子输出的电信号最强,可以达到120m V。体外细胞实验结果表明高强度纳米电场作用下对骨肉瘤细胞的杀灭作用最明显,细胞存活率仅有20.8%。动物体内实验进一步证明高强度纳米电场的抗肿瘤效果。因此,根据以上对超声刺激增强压电粒子的电信号响应性的初步探索实验可知,无源高强度纳米电场为早期骨肉瘤局部治疗提供了一种新的方法。（3）基于骨组织成中压电胶原纤维的多级结构,提出在铌酸钾钠压电植入材料表面构建电信号响应强度不同的微区结构的设想。首先采用激光辐照诱导微区相变法在铌酸钾钠压电植入材料表面构建此微区结构。利用开尔文探针显微镜表征的两区域的电势差异证明未辐照区的电势高于辐照区,表明未辐照区电荷密度较高。压电性不同的微区结构可间接反映两区域输出的电信号强度不同,进而在植入材料表面形成周期性微区电场,以仿生模拟骨组织所处的微区电场环境。体外仿生矿化实验表明电信号响应强度不同的微区结构对磷灰石的沉积具有调控作用,电荷密度高的未辐照区沉积较多的磷灰石。该初步的探索性实验为压电植入材料具有良好的促成骨性能提供良好的基础,仿生微区电场的设计思想也为植入材料的设计提供了新的思路。
翁骏[9]（2020）在《CD443’ UTR增强自然杀伤细胞对肝癌肿瘤干细胞杀伤作用的机制研究》文中研究指明背景:肝癌是人类最常见的恶性肿瘤之一,其死亡率位居全部恶性肿瘤第二位。肝癌的高复发率、易转移和化疗耐药是影响患者长期生存的重要因素。肿瘤干细胞（Cancer Stem Cell,CSC）是肿瘤中拥有自我更新和多向分化的特性的一类特殊细胞,其与肿瘤的复发、转移和化疗耐药密切相关。CD44是肝癌、结肠癌等多种CSC的重要分子标志物,其与CSC的干性维持和自我更新关系紧密。自然杀伤（Natural Killer,NK）细胞可识别杀伤CD44高表达的胰腺癌和胶母细胞瘤CSC,当CSC发生分化且CD44表达下降时NK细胞对其识别杀伤不再敏感。NK细胞能否识别杀伤肝癌CSC,这种杀伤作用是否与CD44相关仍是未知。此外NK细胞识别杀伤肝癌CSC的潜在识别靶点及其调控机制也尚未明确。基于此本文尝试通过研究NK细胞能否识别杀伤肝癌CSC,及此过程中的潜在识别靶点和调控机制,为后续NK细胞治疗肝癌CSC改善肝癌患者预后提供支持。方法:1.HepG2 肝癌细胞系转染 Oct4,Sox2,Klf4,c-Myc（OSKM）和 shMBD3构建CD44不同表达水平的诱导肿瘤干细胞（induced CSC,CD44high/intiCSC）;2.使用ELISA、细胞毒性检测、CRISPRi和抗体拮抗等方法研究NK细胞对iCSC识别杀伤与CD44的关系;3.使用Western Blot和RT-PCR等方法寻找NK细胞识别杀伤iCSC的可能靶点;4.使用基因过表达、荧光素酶报告、突变miRNA结合位点和RNA免疫共沉淀等方法研究CD44 3’非编码区（3’UTR）调控ULBP2表达的机制;5.肿瘤成瘤验证CD44 3’UTR作为内源竞争性RNA（ceRNA）调控ULBP2表达增敏NK细胞识别杀伤。结果:1.OSKM转入HepG2细胞成功构建CD44intiCSC,联合导入shMBD3进一步增强CD44表达构建CD44high iCSC;2.NK细胞对iCSC有识别杀伤作用;3.敲低CD44降低NK细胞对CD44high/intiCSC的识别杀伤,其杀伤能力与iCSC中的CD44表达正相关;4.敲低CD44下调iCSC中NK细胞激活配体ULBP2表达;5.NK细胞通过ULBP2对iCSC进行识别杀伤;6.敲低CD44降低ULBP2 mRNA 的稳定性并增加 miRNA-34a 表达;7.miRNA-34a 可与 CD44 3’UTR（3021bp、4564bp）和ULBP2 3’UTR（1048bp）特异性结合并对其进行调控;8.过表达CD44 3’UTR可增强ULBP2 mRNA稳定性并上调其蛋白表达;9.CD443’UTR 竞争性结合 miRNA-34a 上调 ULBP2 表达;10.CD44 3’UTR 作为 ceRNA调控ULBP2表达增敏NK细胞对iCSC识别杀伤。结论:ULBP2是NK细胞识别杀伤iCSC的重要靶点;CD44 3’UTR作为ceRNA竞争性结合miRNA-34a,阻止其与ULBP2 mRNA 3’UTR结合介导的mRNA稳定性下降,进而上调ULBP2蛋白表达,最终增强NK细胞对iCSC识别杀伤。
买买艾力·玉山[10]（2020）在《rhPDGF-BB基因修饰的BMSCs促进大鼠股骨牵张成骨的研究》文中研究说明目的:1)建立一个合理的可重复的大鼠负重长骨牵张成骨（Distraction Osteogenesis,DO）模型,为今后进一步探讨和深入研究促进牵张成骨区骨再生与矿化的方法以及分子机制奠定基础;2)建立稳定的大鼠骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）的获取和体外培养体系,并进一步扩增,纯化及鉴定。通过人重组血小板衍生生长因子-BB（rhPDGF-BB）基因慢病毒体外转染BMSCs并观察对BMSCs的影响;3)以大鼠自体BMSCs作为载体,通过体外携带rhPDGF-BB基因的慢病毒转染后,将rhPDGF-BB基因修饰的BMSCs导入大鼠股骨牵张间隙中,探讨rhPDGF-BB基因修饰的BMSCs对大鼠股骨牵张间隙新生骨再生矿化的影响,进一步为临床上应用牵张成骨技术（骨传送技术）治疗四肢大段骨缺损探讨一种快速而有效的缩短治疗周期的治疗方法。方法:1)大鼠单侧股骨牵张成骨动物模型的建立:选择雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠为实验动物,<6月龄,350-400g。使用自行研制的延长型外固定器,用10%水合氯醛腹腔注射麻醉后,选择大鼠右侧股骨中段行截骨后用4枚螺钉固定延长型外固定器。术后经过7天潜伏期后进行缓慢牵张,速度为0.5mm/天（分两次）,连续牵张14天,共牵张延长7mm,牵张结束后固定牵张器。分别于牵张结束后第0周,2周,4周及8周四个时间点处死3只动物,处死前麻醉状态下行X线检查,处死后取出右侧股骨标本进行大体观察,组织学HE染色及番红固绿染色观察;2)大鼠BMSCs的分离培养,鉴定及rhPDGF-BB基因体外转染:大鼠自体BMSCs的培养和传代,通过细胞活性检测,碱性磷酸酶（ALP）染色及茜素红染色方法进行细胞鉴定,通过应用密度梯度离心法获取生长状态良好第3代大鼠BMSCs经上述方法鉴定后进一步应用基因转染和下一步的治疗。构建同时携有绿色荧光蛋白（GFP）报告基因和rhPDGF-BB基因的重组慢病毒载体后经体外扩增,纯化后转染大鼠BMSCs观察其体外对BMSCs的影响;3)rhPDGF-BB修饰的骨髓MSCs促进大鼠股骨牵张成骨效果的检测:应用自行研制的延长型外固定器将54只SD大鼠随机分为3组,每组于术后21天分别在牵张区局部注射等剂量rhPDGF-BB修饰的骨髓MSCs（实验组）,骨髓MSCs（实验对照组）,PBS（空白对照组）,活体X线检查于DO牵张结束后不同时间点进行4次,检测时间点为牵张结束（术后天21天）,矿化期2周（术后第35天）,矿化期4周（术后第49天）,矿化期8周（术后第77天）。矿化期第8周末处死动物取双侧股骨,并小心剔除骨组织表面肌肉进行Micro-CT,生物力学及组织病理学检测分析。结果:1)纳入本次实验研究的实验动物活体观察提示所有入组实验动物均耐受手术且顺利完成术后牵张成骨过程,观察期间所有实验动物的饮食及大小便均正常,牵张结束后延长侧股骨较对侧相比达到预定目标长度。通过标准X线检查和组织学观察证实大鼠股骨牵张模型牵张间隙成骨良好;2)应用密度梯度离心法成功分离了大鼠BMSCs,细胞活性检测结果提示细胞生长良好,碱性磷酸酶（ALP）染色及茜素红染色结果提示表达高水平的ALP活性,矿化细胞外基质,形成矿化结节。构建出的rhPDGF-BB基因体外转染鉴定过的大鼠BMSCs,转染后对细胞的生长无明显影响;3)rhPDGF-BB基因修饰的大鼠BMSCs局部应用于大鼠股骨牵张模型。X线片显示,矿化期第8周实验组10只延长区均达到骨性愈合,实验对照组和空白对照组分别为5只和4只达到骨性愈合的标准。生物力学测试（三点力学测试）结果表明实验组所有抗扭强度指标均显着优于其他两个对照组,且实验组抗扭强度指标与自体对侧未牵张正常股骨的抗扭强度相当。Micro-CT扫描后获得的数据结果分析提示矿化期第8周实验组牵张区间隙内新生骨骨痂的主要构成结构由皮质骨构成而松质骨结构极为少见,此外牵张间隙新生骨矿化区可见骨髓腔部分或全部与牵张两骨端骨髓腔基本贯通,其构成和结构与自身长骨管状骨的结构基本类似,而其他两对照组牵张区间隙内新生的骨组织以松质骨结构为主且骨髓腔结构改建较差。矿化期第8周获取的股骨标本行组织学切片后HE和Safranin O染色结果提示,实验组牵张间隙新生骨痂内软骨组织残留较少而两个对照组牵张区间隙新生骨组织结构上仍有部分软组织结构,新生骨已经矿化,皮质骨已连续,骨髓腔开始重建,提示rhPDGF-BB基因修饰的大鼠BMSCs治疗处理后新生骨痂矿化明显。免疫组化结果提示三组中实验组OPN、OCN、VEGF和CD31表达高于两对照组。结论:1)自制延长型外固定器能够满足大鼠单侧股骨牵张的要求,牵张成骨的潜伏期成骨与骨折愈合过程类似,但牵张成骨在其特有的牵张期和矿化期的时间段里牵张区间隙新骨再生具有其特有的组织学变化特点。本实验部分通过所获得的大鼠股骨参数,自制研发出适用于研究SD大鼠股骨牵张成骨模型的微型单边可延长型外固定装置,并顺利构建出可重复性较高适合大批量SD大鼠DO实验研究的动物模型,为今后利用DO动物实验模型并通过细胞或基因治疗缩短治疗周期或DO过程中的细胞分子机制的研究提供动物模型实验平台;2)密度梯度离心法获取的大鼠BMSCs体外培养结果提示其增殖活性较强,鉴定结果提示其可作为本次实验研究进行细胞治疗以及基因治疗较为理想的种子细胞。目的基因靶细胞转染后在不同时间点通过不同倍数荧光显微镜下观察结果提示,脂质载体介导的瞬时转染可以使rhPDGF-BB基因在BMSCs中成功表达;3)X线,Micro-CT,生物力学,组织学和免疫组织化学观察都证实,与单纯BMSCs及PBS相比,rhPDGF-BB基因修饰的BMSCs可较为有效的促进大鼠股骨牵张间隙区成骨过程中新骨的形成和矿化。应用rhPDGF-BB基因体外转染BMSCs于牵张结束后局部应用能够促进牵张成骨中的骨再生从而缩短DO治疗周期,为临床上应用牵张成骨（骨传送）技术治疗骨缺损提供了一个新的策略。
二、以研究成保持干细胞活性的新方法（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、以研究成保持干细胞活性的新方法（论文提纲范文）
（1）FGD5维持乳腺发育以及促进基底样乳腺癌发生发展的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 综述 靶向三阴性乳腺癌肿瘤干细胞治疗策略的研究进展 |
| 1 三阴性乳腺癌概述 |
| 1.1 TNBC的分型及临床特征 |
| 1.2 TNBC的流行病学和病原学研究 |
| 1.3 三阴性乳腺癌的治疗策略 |
| 2 肿瘤干细胞在三阴性乳腺癌治疗中的临床意义 |
| 3 分子信号在TNBC肿瘤干细胞中调控作用 |
| 3.1 TNBC肿瘤干细胞标志物 |
| 3.2 分子信号通路对三阴性乳腺癌肿瘤干细胞的调控作用 |
| 4 靶向肿瘤干细胞治疗三阴性乳腺癌的新策略 |
| 5 结语 |
| 参考文献 |
| 第一章 FGD5促进乳腺发育及基底样乳腺癌发生发展 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 动物 |
| 1.2 细胞分离培养试剂 |
| 1.3 免疫组化及免疫荧光相关试剂 |
| 1.4 抗体及其它 |
| 1.5 仪器 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 乳腺上皮细胞分离方法 |
| 2.2 乳腺上皮细胞悬浮培养和集落形成实验 |
| 2.3 免疫组化及免疫荧光染色 |
| 2.4 小鼠乳腺导管全景染色 |
| 2.5 乳腺重构 |
| 2.6 实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR) |
| 2.7 流式细胞检测 |
| 2.8 蛋白提取实验 |
| 2.9 蛋白免疫印迹(Western blotting) |
| 2.10 条件性敲除小鼠构建 |
| 2.11 体外增殖试验 |
| 2.12 体外侵袭试验 |
| 2.13 克隆形成试验 |
| 2.14 谱系示踪模型 |
| 2.15 统计学分析 |
| 结果 |
| 一、FGD5调节青春期小鼠乳腺发育 |
| 1.1 FGD5在乳腺干细胞群高表达 |
| 1.2 乳腺上皮特异性敲除Fgd5延缓小鼠青春期乳腺发育 |
| 1.3 乳腺上皮特异性敲除Fgd5抑制乳腺上皮细胞增殖能力 |
| 二、FGD5维持乳腺上皮干细胞数量和功能 |
| 2.1 乳腺上皮特异性敲除Fgd5抑制乳腺上皮干细胞数量 |
| 2.2 敲除FGD5抑制乳腺上皮细胞克隆形成能力 |
| 2.3 敲除FGD5抑制乳腺上皮重构能力 |
| 2.4 敲除FGD5抑制基底样和管腔样乳腺上皮重构能力 |
| 三、FGD5阳性细胞具有乳腺上皮干细胞特征 |
| 3.1 Fgd5阳性细胞群在基底细胞中富集 |
| 3.2 Fgd5阳性细胞具有自我更新能力 |
| 3.3 Fgd5阳性细胞具有分化为基底细胞和管腔细胞的能力 |
| 四、FGD5促进基底样乳腺癌发生发展 |
| 4.1 敲除Fgd5抑制基底样乳腺癌小鼠乳腺导管增生及上皮干细胞数量 |
| 4.2 FGD5促进基底样乳腺癌发生 |
| 4.3 敲除FGD5抑制BLBC增殖能力 |
| 4.4 敲除FGD5抑制BLBC侵袭表型 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二章 FGD5维持肿瘤干细胞性状促进基底样乳腺癌发生发展 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 动物 |
| 1.2 细胞系 |
| 1.3 表达载体 |
| 1.4 病毒 |
| 1.5 临床样本 |
| 1.6 细胞培养试剂 |
| 1.7 抗体及其它 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 原代肿瘤单细胞分离 |
| 2.2 肿瘤细胞3D培养 |
| 2.3 人乳腺癌类器官分离培养 |
| 2.4 先导肽设计合成 |
| 2.5 流式细胞分析 |
| 2.6 体外泛素化 |
| 2.7 实时定量PCR |
| 2.8 细胞膜和早期内体蛋白分离纯化 |
| 2.9 免疫共沉淀 |
| 2.10 回膜试验 |
| 2.11 表面等离子共振分析 |
| 2.12 基因集富集分析(GSEAs) |
| 2.13 类器官活死细胞染色 |
| 2.14 统计分析 |
| 结果 |
| 一、FGD5通过维持EGFR表达促进基底样乳腺癌发生发展 |
| 1.1 FGD5对BLBC细胞中CDC42功能调节较弱 |
| 1.2 FGD5调节EGFR信号通路 |
| 1.3 EGFR维持BLBC侵袭表型 |
| 1.4 FGD5通过调节EGFR信号通路维持BLBC侵袭表型 |
| 二、FGD5与EGFR相互作用阻碍其泛素化和降解 |
| 2.1 FGD5维持EGFR稳定性 |
| 2.2 FGD5与EGFR相互作用 |
| 2.3 FGD5通过抑制EGFR泛素化维持其蛋白稳定性 |
| 三、FGD5妨碍ITCH介导的EGFR泛素化和降解促进基底样乳腺癌发生发展 |
| 3.1 筛选介导EGFR泛素化和降解的E3泛素连接酶 |
| 3.2 ITCH介导EGFR泛素化和降解 |
| 3.3 ITCH是介导EGFR泛素化和降解的E3泛素连接酶 |
| 3.4 ITCH的C830位是其介导EGFR泛素化的活性位点。 |
| 3.5 ITCH调节EGFR蛋白表达及信号活化。 |
| 3.6 FGD5抑制ITCH与EGFR的相互作用 |
| 3.7 FGD5抑制ITCH介导EGFR的泛素化和降解 |
| 3.8 FGD5抑制ITCH/EGFR轴促进BLBC疾病进展 |
| 四、破坏FGD5/EGFR相互作用抑制基底样乳腺癌干性和疾病进展 |
| 4.1 打断FGD5/EGFR相互作用的多肽筛选 |
| 4.2 打断FGD5/EGFR相互作用降低EGFR蛋白水平 |
| 4.3 打断FGD5/EGFR相互作用抑制EGFR及其代偿信号通路活化 |
| 4.4 打断FGD5/EGFR相互作用抑制EGFR代偿信号通路活化 |
| 4.5 打断FGD5/EGFR相互作用抑制BLBC干性、侵袭能力和增殖活性 |
| 4.6 打断FGD5/EGFR相互作用增加BLBC化疗药敏感性 |
| 4.7 先导肽PER3抑制BLBC肿瘤生长与EGFR和FGD5表达水平相关 |
| 4.8 先导肽PER3抑制BLBC肿瘤生长机制研究 |
| 4.9 联用紫杉醇与先导肽PER3增加耐药株敏感性 |
| 五、FGD5维持肿瘤干细胞性状促进BLBC发生发展的作用及机制总结 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（2）细胞光遗传学操控与同步传感检测的技术开发与应用研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 1 绪论 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.1.1 光遗传学技术 |
| 1.1.2 细胞水平的传感检测分析系统 |
| 1.1.3 细胞的线粒体凋亡及其相关信号通路 |
| 1.1.4 肿瘤细胞的上皮间质转化(EMT) |
| 1.2 国内外研究现状 |
| 1.2.1 常见的光遗传学元件及功能介绍 |
| 1.2.2 光遗传学在细胞生物学领域的应用 |
| 1.2.3 传感器阵列在细胞活性检测领域的应用 |
| 1.2.4 LED阵列光源在光遗传学研究中的应用 |
| 1.3 研究意义与主要研究内容 |
| 1.3.1 研究意义 |
| 1.3.2 主要研究内容 |
| 1.4 本章小结 |
| 2 基于光遗传学操控与阻抗实时分析的高通量筛选方法的建立 |
| 2.1 引言 |
| 2.1.1 光遗传学方法在药物筛选中的优势 |
| 2.1.2 阻抗分析方法在药物筛选中的优势 |
| 2.2 实验材料与方法 |
| 2.2.1 实验对象 |
| 2.2.2 实验试剂与仪器 |
| 2.2.3 实验方法 |
| 2.3 实验结果与分析 |
| 2.3.1 无线程控LED阵列及其针对RTCA系统的改进 |
| 2.3.2 基于RTCA系统与光遗传学的高通量筛选方法建立 |
| 2.4 本章小结 |
| 3 光控线粒体凋亡与其对细胞阻抗影响的研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.1.1 细胞线粒体凋亡的标志与检测方法 |
| 3.1.2 顺铂与Opto-Bax诱导的细胞凋亡 |
| 3.2 实验材料与方法 |
| 3.2.1 实验对象 |
| 3.2.2 实验试剂与仪器 |
| 3.2.3 实验方法 |
| 3.3 实验方案与结果分析 |
| 3.3.1 RTCA系统对细胞凋亡现象的响应及分析 |
| 3.3.2 Opto-Bax系统诱导的细胞凋亡 |
| 3.3.3 RTCA系统记录光遗传学诱导细胞凋亡 |
| 3.3.4 基于结合系统的细胞线粒体凋亡药物筛选的初步研究 |
| 3.4 本章小结 |
| 4 光控肿瘤细胞EMT与其对细胞阻抗影响的研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.1.1 EMT发生的标志与生理变化 |
| 4.1.2 药物(TGF-β)与Opto-PI3K诱导下的肿瘤细胞EMT |
| 4.2 实验材料与方法 |
| 4.2.1 实验对象 |
| 4.2.2 实验试剂与仪器 |
| 4.2.3 实验方法 |
| 4.3 实验方案与结果分析 |
| 4.3.1 RTCA系统对肿瘤细胞EMT的响应及分析 |
| 4.3.2 Opto-PI3K系统诱导下的A549细胞EMT |
| 4.3.3 A549 细胞EMT发生中的细胞阻抗变化记录 |
| 4.3.4 光遗传学方法与药物刺激方法诱导A549细胞EMT的对比 |
| 4.3.5 基于集成系统的肿瘤细胞EMT药物筛选的初步研究 |
| 4.4 本章小结 |
| 5 总结与展望 |
| 5.1 总结 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 作者简历 |
（3）调控Wnt和Activin/Nodal信号高效建立和悬浮扩增人多能干细胞（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 多能干细胞概述 |
| 1.2 多能干细胞的应用 |
| 1.3 多能干细胞应用的支撑——多能干细胞的建立及培养 |
| 1.3.1 多能干细胞的多能性维持——培养体系的发展 |
| 1.3.2 多能性干细胞培养方式的发展 |
| 1.4 多能干细胞和胚胎中Epiblast的信号通路与多能性调控 |
| 1.4.1 多能干细胞和胚胎中Epiblast的Wnt信号通路与多能性调控 |
| 1.4.2 多能干细胞和胚胎中Epiblast的Activin/Nodal信号通路与多能性调控 |
| 1.5 论文的立题依据和主要研究内容 |
| 第二章 实验材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 材料来源 |
| 2.1.2 细胞系 |
| 2.1.3 主要试剂及其配制方法 |
| 2.1.4 主要抗体 |
| 2.1.5 仪器设备 |
| 2.1.6 实验耗材 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 MEF培养及其饲养层制备 |
| 2.2.2 传统体系(KOSR/bFGF)下的胚胎干细胞建系及其培养 |
| 2.2.3 传统体系(KOSR/bFGF)下的iPSCs建系及其培养 |
| 2.2.4 贴壁细胞(2D培养)免疫荧光染色 |
| 2.2.5 正交实验 |
| 2.2.6 畸胎瘤实验 |
| 2.2.7 石蜡切片及其HE染色 |
| 2.2.8 单细胞克隆实验 |
| 2.2.9 流式分析 |
| 2.2.10 Western Blot |
| 2.2.11 细胞周期分析 |
| 2.2.12 AIC体系下多能性干细胞的培养 |
| 2.2.13 AIC体系下iPSCs的建立 |
| 2.2.14 耗氧率测试 |
| 2.2.15 AIC体系下,多能性干细胞的无饲养层建系 |
| 2.2.16 碱性磷酸酶染色(AP染色) |
| 2.2.17 生长曲线绘制 |
| 2.2.18 不同培养体系(AIC或者E8、StemFlex)下多能性干细胞的悬浮培养 |
| 2.2.19 台盼蓝染色 |
| 2.2.20 细胞球(3D培养)的冰冻切片及免疫荧光染色 |
| 2.2.21 多能性干细胞团块的直径定量 |
| 2.2.22 染色体核型分析 |
| 2.2.23 转录组分析 |
| 2.2.24 用e-SNP分析检测染色体重复 |
| 2.2.25 应用e-SNP分析检测LOH |
| 2.2.26 Pluri Test分析 |
| 2.2.27 染色体20q11.21增益的测定 |
| 2.2.28 TP53 突变基因组序列 |
| 2.2.29 GSEA |
| 2.2.30 三胚层体外分化 |
| 2.2.31 嵌合体实验 |
| 第三章 实验结果 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 新多能干细胞培养体系的摸索与建立 |
| 3.2.1 传统培养体系(KOSR/bFGF)下多能干细胞的建立 |
| 3.2.2 Wnt和 Activin信号对多能干细胞的调控作用 |
| 3.2.3 新的多能干细胞培养体系(AIC)的建立 |
| 3.3 AIC体系及其多能干细胞的特性探索 |
| 3.3.1 AIC支持多能干细胞在饲养层上高效建立及扩增 |
| 3.3.2 AIC体系下支持PSC无饲养层高效衍生及单细胞扩增 |
| 3.3.3 AIC体系支持多能干细胞的高效稳定悬浮扩增 |
| 3.3.4 Stem Flex(SF)和E8 的悬浮培养及与AIC多能干细胞的比较 |
| 3.3.5 AIC多能干细胞保持基因组稳定性 |
| 3.3.6 AIC多能干细胞的基因表达特征 |
| 3.4 Wnt and Activin/Nodal信号维持干细胞多能性的机制探索 |
| 3.5 AIC多能干细胞的功能验证 |
| 3.6 AIC多能干细胞的应用 |
| 第四章 结论 |
| 第五章 讨论与展望 |
| 5.1 多能性干细胞培养体系的建立 |
| 5.2 AIC多能干细胞的发育潜能 |
| 5.3 多能性干细胞的信号通路调控 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录A 攻读博士期间取得的科研成果及奖励 |
| 附录B 医学伦理证明 |
（4）仿生液晶态氧化石墨烯/多糖复合体系的构建及其对hBMSCs生物学行为的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 氧化石墨烯(GO)概述 |
| 1.1.1 GO简介 |
| 1.1.2 GO的合成与制备 |
| 1.1.3 GO液晶简介 |
| 1.1.4 GO在生物医学领域的应用 |
| 1.2 海藻酸钠(SA)的简介 |
| 1.2.1 SA的合成 |
| 1.2.2 SA的应用 |
| 1.3 透明质酸(HA)的简要概述 |
| 1.3.1 HA简介 |
| 1.3.2 HA生产方法 |
| 1.3.3 HA的应用 |
| 1.4 液晶的简介 |
| 1.4.1 液晶的定义及其由来 |
| 1.4.2 液晶按不同条件的分类 |
| 1.4.3 生物体内存在天然液晶 |
| 1.5 研究问题的提出和研究意义 |
| 1.6 本文的研究内容和创新点 |
| 1.6.1 主要研究内容 |
| 1.6.2 主要创新点 |
| 第二章 氧化石墨烯及氧化石墨烯/多糖液晶体系的制备与表征 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验试剂与仪器 |
| 2.2.1 主要实验试剂 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.3 GO的制备 |
| 2.3.1 GO原液的制备 |
| 2.3.2 GO的提纯 |
| 2.4 GO的表征 |
| 2.4.1 GO的形貌表征 |
| 2.4.2 GO液晶的POM表征 |
| 2.4.3 GO的AFM扫描形貌图 |
| 2.4.4 GO液晶表征结果 |
| 2.5 GO/SA液晶体系的制备与表征 |
| 2.5.1 GO/SA液晶体系的制备 |
| 2.5.2 GO、GO/SA液晶复合体系的分子结构表征与对照 |
| 2.5.3 GO/SA液晶体系Zeta电位的表征 |
| 2.5.4 GO/SA液晶体系TG的表征 |
| 2.5.5 GO/SA液晶体系拉曼图谱表征 |
| 2.5.6 GO/SA液晶体系的POM表征 |
| 2.6 GO/SA体系表征的结果与讨论 |
| 2.6.1 GO、GO/SA体系红外光谱图 |
| 2.6.2 GO/SA溶液Zeta电位的表征 |
| 2.6.3 GO/SA体系TG的表征 |
| 2.6.4 GO/SA体系拉曼光谱的表征 |
| 2.6.5 GO/SA溶液液晶的表征 |
| 2.7 GO/HA体系的制备及表征 |
| 2.7.1 GO/HA液晶体系的制备 |
| 2.7.2 GO/HA溶液液晶POM表征 |
| 第三章 氧化石墨烯/多糖液晶体系生物材料的制备与表征 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验试剂与仪器 |
| 3.2.1 实验试剂 |
| 3.2.2 实验仪器 |
| 3.3 GO/SA液晶基支架的制备与表征 |
| 3.3.1 实验方法 |
| 3.3.2 GO/SA液晶基支架的力学表征 |
| 3.3.3 GO/SA液晶基支架材料SEM形貌表征 |
| 3.3.4 GO/SA液晶基支架材料吸水率 |
| 3.4 GO/SA液晶基膜的制备与表征 |
| 3.4.1 GO/SA液晶基膜的制备 |
| 3.4.2 GO/SA液晶基膜扫描SEM形貌表征 |
| 3.4.3 GO/SA液晶基膜的AFM形貌表征 |
| 3.5 GO/HA液晶培养基的制备及表征 |
| 3.5.1 GO/HA液晶培养基的制备方法 |
| 3.5.2 GO/HA液晶培养基在偏光显微镜下的表征 |
| 3.6 本章小结 |
| 第四章 氧化石墨烯/多糖液晶体系的生物相容性评价 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验试剂及仪器 |
| 4.2.1 实验试剂 |
| 4.2.2 实验仪器 |
| 4.3 GO/SA液晶基膜的生物相容性评价 |
| 4.3.1 实验组与对照组液晶基膜的制备 |
| 4.3.2 hBMSCs细胞培养的MTT检测 |
| 4.3.3 hBMSCs死活染色 |
| 4.3.4 hBMSCs48 h骨架及核染色 |
| 4.3.5 hBMSCs梯度脱水 |
| 4.3.6 hBMSCs细胞SEM形貌表征 |
| 4.3.7 hBMSCs碱性磷酸酶(ALP)活性检测 |
| 4.3.8 hBMSCs培养及ALP染色 |
| 4.3.9 hBMSCs茜素红染色 |
| 4.4 GO/SA液晶基膜生物相容性评价的结果与讨论 |
| 4.4.1 hBMSCs培养的活性检测结果与讨论 |
| 4.4.2 hBMSCs死活染色结果与讨论 |
| 4.4.3 hBMSCs 骨架及核的染色结果与讨论 |
| 4.4.4 hBMSCs的 SEM形貌表征的结果与讨论 |
| 4.4.5 hBMSCs成骨分化碱性磷酸酶(ALP)活性检测的结果与讨论 |
| 4.4.6 hBMSCs成骨分化培养的ALP染色的结果与讨论 |
| 4.4.7 hBMSCs成骨分化培养的茜素红染色的结果与讨论 |
| 4.5 GO/HA液晶培养基的生物相容性评价 |
| 4.5.1 hBMSCs活性检测 |
| 4.5.2 hBMSCs死活染色 |
| 4.6 GO/HA液晶培养基生物相容性评价的结果与讨论 |
| 4.6.1 hBMSCs活性检测的结果与讨论 |
| 4.6.2 hBMSCs死活染色的结果与讨论 |
| 4.7 GO/SA支架对于小鼠颅盖骨缺损修复性能研究 |
| 4.7.1 前言 |
| 4.7.2 实验试剂与材料 |
| 4.7.3 实验仪器 |
| 4.7.4 动物实验 |
| 4.7.5 成骨评价 |
| 4.8 GO/SA支架对于小鼠颅盖骨缺损修复性能的结果与分析 |
| 4.8.1 CT扫描三维立体图的结果与讨论 |
| 4.8.2 骨体积百分比 |
| 4.8.3 骨密度 |
| 4.8.4 骨小梁厚度 |
| 4.9 本章总结 |
| 第五章 全文总结 |
| 参考文献 |
| 研究生期间取得的科研成果 |
| 致谢 |
（5）兼具促成骨及抗菌性能钛基植入体表面改性及其生物学评价（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 主要缩略词 |
| 1 绪论 |
| 1.1 问题的提出及研究意义 |
| 1.2 生物功能化钛基植入体的研究现状 |
| 1.3 促成骨分化钛基植入材料的制备 |
| 1.3.1 微纳拓扑结构 |
| 1.3.2 仿生细胞外基质 |
| 1.4 抗菌型钛基材料的制备 |
| 1.4.1 细菌在材料表面的粘附过程 |
| 1.4.2 抗菌性涂层的研究现状 |
| 1.4.3 抗细菌粘附涂层 |
| 1.4.4 抗菌剂释放涂层 |
| 1.4.5 细菌接触抑制涂层 |
| 1.4.6 多功能化的复合涂层 |
| 1.5 本文研究思路及主要研究内容 |
| 1.5.1 本文研究思路 |
| 1.5.2 本文研究的主要内容 |
| 1.6 本文的创新点 |
| 2 N-Cl改性壳聚糖多层结构表面修饰钛基材及细菌抑制的研究 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 主要设备仪器 |
| 2.2.3 Chi-HDH-Cl的制备 |
| 2.2.4 Chi-HDH-Cl的表征 |
| 2.2.5 多层膜的构建与表征 |
| 2.2.6 LBL(Cl)表面Cl~+的释放行为 |
| 2.2.7 抗菌实验 |
| 2.2.8 成骨细胞的分离与培养 |
| 2.2.9 成骨细胞形态观察 |
| 2.2.10 细胞活力测定 |
| 2.2.11 细胞分化评价 |
| 2.2.12 统计分析 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 Chi-HDH和Chi-HDH-Cl聚合物的合成与表征 |
| 2.3.2 聚电解质多层膜的制备与表征 |
| 2.3.3 Cl~+的体外释放 |
| 2.3.4 抗菌评价 |
| 2.3.5 细胞相容性评价 |
| 2.3.6 成骨细胞分化考察 |
| 2.3.7 成骨基因表达检测 |
| 2.4 结论 |
| 3 二氧化钛纳米管阵列表面pH响应性多层膜构建及其抑菌/促成骨活性研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.2.1 主要实验材料与化学试剂 |
| 3.2.2 主要仪器设备 |
| 3.2.3 醛基化海藻酸钠的制备 |
| 3.2.4 醛基化海藻酸钠-庆大霉素(ADA-Gen)的合成 |
| 3.2.5 二氧化钛纳米管的制备(TNTs) |
| 3.2.6 pH响应性涂层的制备 |
| 3.2.7 样品表征 |
| 3.2.8 pH响应性药物释放考察 |
| 3.2.9 BMP2的释放行为 |
| 3.2.10 抗菌评价 |
| 3.2.11 成骨评价 |
| 3.2.12 金黄色葡萄球菌和成骨细胞共培养 |
| 3.2.13 统计分析 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 pH响应型ADA-Gen聚合物的合成与表征 |
| 3.3.2 样品制作与表征 |
| 3.3.3 药物pH响应性释放行为 |
| 3.3.4 最小抑菌浓度的测定 |
| 3.3.5 抗菌评价和细菌形态观察 |
| 3.3.6 成骨细胞行为评价 |
| 3.3.7 金黄色葡萄球菌和成骨细胞的共培养 |
| 3.4 结论 |
| 4 钛合金表面氧化石墨烯-Zn~(2+)涂层的构建及其抑菌/促成骨活性的研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 主要实验材料与化学试剂 |
| 4.2.2 主要仪器设备 |
| 4.2.3 GOMA的制备 |
| 4.2.4 GelMA的合成 |
| 4.2.5 GelMA/PBA的合成 |
| 4.2.6 GO-Zn涂层的制备 |
| 4.2.7 GO-Zn/GelMA涂层的制备 |
| 4.2.8 Zn~(2+)的释放考察 |
| 4.2.9 蛋白质吸附 |
| 4.2.10 细胞培养 |
| 4.2.11 乳酸脱氢酶活力 |
| 4.2.12 成骨细胞活/死染色 |
| 4.2.13 细胞相容性评价 |
| 4.2.14 碱性磷酸酶活力 |
| 4.2.15 天狼星红染色和定量 |
| 4.2.16 茜素红染色和定量 |
| 4.2.17 定量实时PCR(RT-PCR)分析 |
| 4.2.18 Western blotting分析 |
| 4.2.19 抑菌实验 |
| 4.2.20 抑菌圈实验 |
| 4.2.21 抑制生物膜形成评价 |
| 4.2.22 细菌形态观察 |
| 4.2.23 脂质过氧化物分析 |
| 4.2.24 细菌细胞膜完整性考察 |
| 4.2.25 数据分析 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 目标分子制备和表征 |
| 4.3.2 样品制作与表征 |
| 4.3.3 Zn~(2+)的释放 |
| 4.3.4 细胞相容性评价 |
| 4.3.5 体外成骨活性 |
| 4.3.6 抗菌评价 |
| 4.3.7 潜在的抗菌途径 |
| 4.4 结论 |
| 5 钛植入体表面ZIF-8@Levo/LBL涂层构筑及细菌抑制/促体内骨形成的研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 主要实验材料与化学试剂 |
| 5.2.2 主要仪器设备 |
| 5.2.3 ZIF-8和ZIF-8@Levo的合成 |
| 5.2.4 ZIF-8@Levo的表征 |
| 5.2.5 ZIF-8@Levo/LBL涂层的制备以及表征 |
| 5.2.6 MOF、MOF@Levo以及MOF@Levo/LBL释放Zn~(2+)的研究 |
| 5.2.7 MOF@Levo和MOF@Levo/LBL样品释放Levo的研究 |
| 5.2.8 MOF@Levo/LBL涂层稳定性分析 |
| 5.2.9 DMEM和MHB溶液中MOF@Levo/LBL表面pH变化 |
| 5.2.10 细胞实验 |
| 5.2.11 抗菌实验 |
| 5.2.12 金黄色葡萄球菌和成骨细胞共培养 |
| 5.2.13 动物实验 |
| 5.2.14 统计学分析 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 ZIF-8和ZIF-8@Levo的合成与表征 |
| 5.3.2 MOF@Levo/LBL涂层的表面理化性质分析 |
| 5.3.3 涂层中Levo和Zn~(2+)的释放 |
| 5.3.4 MOF@Levo/LBL涂层碱性评价 |
| 5.3.5 乳酸脱氢酶以及细胞活/死染色 |
| 5.3.6 细胞粘附以及细胞形貌观察 |
| 5.3.7 成骨细胞分化评价 |
| 5.3.8 荧光实时定量PCR(qRT-PCR)分析 |
| 5.3.9 体外抗菌考察 |
| 5.3.10 潜在抗菌途径 |
| 5.3.11 体内动物实验 |
| 5.4 结论 |
| 6 结论及展望 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| A.作者在攻读博士学位期间科研及发表的论文 |
| B.作者攻读学位期间参与的科研项目 |
| C.学位论文数据集 |
| 致谢 |
（6）基于丝蛋白纳米纤维的材料仿生设计及促进组织再生的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 第一章 引言 |
| 1.1 组织微环境 |
| 1.2 组织工程仿生材料 |
| 1.2.1 天然仿生材料 |
| 1.2.2 仿生复合材料 |
| 1.2.3 多功能仿生材料 |
| 1.3 丝蛋白生物材料 |
| 1.3.1 丝蛋白结构 |
| 1.3.2 丝蛋白生物材料的结构设计及应用 |
| 1.4 本课题研究目的、内容和创新点 |
| 1.4.1 研究目的 |
| 1.4.2 研究内容 |
| 1.4.3 创新点 |
| 第二章 丝蛋白支架的取向结构设计及促血管化能力的研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 实验材料与试剂 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.2.3 实验方法 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 丝蛋白支架形貌与结构表征 |
| 2.3.2 支架材料的生物相容性 |
| 2.3.3 材料体外血管化能力 |
| 2.3.4 丝蛋白支架全层皮肤缺损模型研究 |
| 2.3.5 丝蛋白支架体内血管化能力 |
| 2.3.6 创面组织形态学H&E染色 |
| 2.3.7 创面组织形态学Masson’s trichrome染色 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 可注射丝蛋白纳米纤维水凝胶对小分子药物的长效控释及促血管化研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 实验材料与试剂 |
| 3.2.2 主要实验仪器 |
| 3.2.3 实验方法 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 丝蛋白/去铁胺复合凝胶理化性能 |
| 3.3.2 丝蛋白/去铁胺复合凝胶的生物相容性 |
| 3.3.3 丝蛋白/去铁胺复合凝胶中HUVEC的迁移 |
| 3.3.4 丝蛋白/去铁胺复合凝胶的体外促血管化能力 |
| 3.3.5 皮肤创面愈合及组织学评价 |
| 3.3.6 丝蛋白/去铁胺复合凝胶的体内血管化能力 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 基于不同信号独立调控的高强度丝蛋白纳米纤维凝胶的制备及成骨性能的研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 实验材料与试剂 |
| 4.2.2 主要实验仪器 |
| 4.2.3 实验方法 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 丝蛋白纳米纤维凝胶形貌 |
| 4.3.2 丝蛋白凝胶物理性能 |
| 4.3.3 rBMSCs在丝蛋白凝胶上的形态及增殖 |
| 4.3.4 rBMSCs在丝蛋白凝胶上的粘附行为 |
| 4.3.5 rBMSCs在丝蛋白凝胶上的成骨分化 |
| 4.3.6 丝蛋白凝胶体内成骨诱导性能 |
| 4.3.7 丝蛋白凝胶体内骨再生能力 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间本人出版或公开发表的论着、论文 |
| 附录 :英文缩略表 |
| 致谢 |
（7）3D打印器件与微流控技术的肿瘤微环境系统生物学分析（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩写清单 |
| 1 引言 |
| 2 文献综述 |
| 2.1 癌症的侵袭与转移 |
| 2.2 肿瘤微环境 |
| 2.2.1 肿瘤微环境中的细胞 |
| 2.2.2 肿瘤微环境中的细胞外基质 |
| 2.3 微流控技术在肿瘤方面的研究 |
| 2.3.1 微流控技术简介 |
| 2.3.2 微流控技术在二维细胞模型上的应用 |
| 2.3.3 微流控技术在三维细胞模型上的应用 |
| 2.4 3D打印微流控芯片技术 |
| 2.5 本论文主要研究内容 |
| 3 基于3D打印技术的积木拼插式装置对于肿瘤迁移的研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 材料与试剂 |
| 3.2.2 设备仪器 |
| 3.2.3 3D打印积木拼插式设备 |
| 3.2.4 细胞培养 |
| 3.2.5 siRNA干扰实验 |
| 3.2.6 细胞活性实验 |
| 3.2.7 Ki67免疫荧光染色 |
| 3.2.8 细胞示踪染色 |
| 3.2.9 蛋白质印记法 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 3D打印装备设计和细胞图案化 |
| 3.3.2 胎牛血清浓度对癌细胞迁移的影响 |
| 3.3.3 抑制性药物对癌细胞迁移的影响 |
| 3.3.4 基因沉默对癌细胞迁移的影响 |
| 3.3.5 研究成纤维细胞对肿瘤细胞的影响 |
| 3.4 本章小结 |
| 4 基于3D打印装置形成的细胞图案进行的系统生物学分析 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 材料与试剂 |
| 4.2.2 设备仪器 |
| 4.2.3 细胞培养 |
| 4.2.4 波形蛋白和α-平滑肌肌动蛋白免疫荧光染色 |
| 4.2.5 培养基中蛋白含量的测定 |
| 4.2.6 细胞挑选 |
| 4.2.7 转录组文库制备 |
| 4.2.8 实时荧光定量PCR分析基因表达水平 |
| 4.2.9 测序数据分析 |
| 4.2.10 裸鼠异种移植瘤肿瘤模型 |
| 4.2.11 流式细胞分析 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 利用3D打印装置研究被肿瘤细胞驯化的成纤维细胞 |
| 4.3.2 用于研究肿瘤生长的体内肿瘤异种移植模型 |
| 4.3.3 模拟肿瘤微环境解析肿瘤的发生 |
| 4.4 本章小结 |
| 5 利用3D打印微流控芯片制备三维肿瘤细胞团块 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验部分 |
| 5.2.1 材料与试剂 |
| 5.2.2 设备仪器 |
| 5.2.3 制备用于培养细胞团块的微流控装置 |
| 5.2.4 细胞培养 |
| 5.2.5 三维细胞团块培养 |
| 5.2.6 细胞团块示踪染色 |
| 5.2.7 活死细胞染色 |
| 5.2.8 研究细胞团块在细胞外基质的迁移 |
| 5.2.9 三维细胞团块和二维细胞的共培养 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 三维细胞团块的制备 |
| 5.3.2 多图案组织工程构建 |
| 5.3.3 三维细胞团块在基质胶中侵袭的研究 |
| 5.3.4 三维细胞团块在人脐静脉内皮细胞中的侵袭研究 |
| 5.4 本章小结 |
| 6 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简历及在学研究成果 |
| 学位论文数据集 |
（8）电信号响应性铌酸钾钠基植入材料及其生物学性能研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词对照表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 骨肉瘤及其治疗现状 |
| 1.1.1 骨肉瘤概述 |
| 1.1.2 骨肉瘤的治疗现状 |
| 1.1.3 植入材料在骨肉瘤治疗中的研究进展 |
| 1.2 植入材料感染及其抗菌方法 |
| 1.2.1 植入材料感染概述 |
| 1.2.2 抗菌剂的抗菌机理 |
| 1.2.3 植入材料抗菌的方法 |
| 1.3 电刺激在临床治疗的应用 |
| 1.3.1 生命体的电学特性 |
| 1.3.2 电刺激在治疗肿瘤方面的应用 |
| 1.3.3 电刺激在消除细菌感染方面的应用 |
| 1.3.4 电刺激在修复骨组织方面的应用 |
| 1.4 压电材料 |
| 1.4.1 压电材料的定义与分类 |
| 1.4.2 骨的压电效应 |
| 1.4.3 压电材料在生物医学方面的应用 |
| 1.4.4 铌酸钾钠基压电材料 |
| 1.5 本文研究意义及研究内容 |
| 第二章 电信号响应性铌酸钾钠基植入材料抗肿瘤性能研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与实验方法 |
| 2.2.1 主要实验试剂 |
| 2.2.2 主要实验仪器 |
| 2.2.3 铜掺杂铌酸钾钠压电植入材料制备 |
| 2.2.4 材料理化性质表征 |
| 2.2.5 材料体外仿生矿化性能表征 |
| 2.2.6 材料生物学性能表征 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 材料的形貌、压电性能及离子释放 |
| 2.3.2 材料的结构及铜掺杂状态 |
| 2.3.3 材料表面电信号调控 |
| 2.3.4 材料的细胞相容性和诱导矿化能力 |
| 2.3.5 材料的体外抗肿瘤性能及其抗肿瘤机制 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 电信号响应性铌酸钾钠基植入材料抗菌性能研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与实验方法 |
| 3.2.1 主要实验试剂 |
| 3.2.2 主要实验仪器 |
| 3.2.3 铜掺杂铌酸钾钠压电植入材料的制备 |
| 3.2.4 材料理化性质表征 |
| 3.2.5 细菌培养实验步骤 |
| 3.2.6 场发射扫描电子显微镜观察材料表面细菌形貌 |
| 3.2.7 细菌死活染色检测 |
| 3.2.8 细菌细胞内活性氧检测 |
| 3.2.9 细胞实验研究 |
| 3.2.10 细菌细胞内Cu2+离子浓度检测 |
| 3.2.11 统计学分析 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 材料表面电信号调控 |
| 3.3.2 材料的细胞相容性 |
| 3.3.3 材料的抗菌性能 |
| 3.3.4 材料的抗菌机制 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 超声刺激作用下电信号响应性铌酸钾钠基压电粒子抗肿瘤性能研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与实验方法 |
| 4.2.1 主要实验试剂 |
| 4.2.2 主要实验仪器 |
| 4.2.3 铜掺杂铌酸钾钠压电粒子的制备 |
| 4.2.4 材料理化性质表征 |
| 4.2.5 体外抗肿瘤实验 |
| 4.2.6 体内动物实验 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 压电粒子的形貌、粒径和物相性能 |
| 4.3.2 超声刺激作用下压电粒子的电信号响应性 |
| 4.3.3 超声刺激作用下压电粒子的生物相容性 |
| 4.3.4 超声刺激作用下压电粒子的体外抗肿瘤性能 |
| 4.3.5 超声刺激作用下压电粒子的体内抗肿瘤性能 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 电信号响应性铌酸钾钠植入材料表面微区结构的构建 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与实验过程 |
| 5.2.1 主要实验试剂 |
| 5.2.2 主要实验仪器 |
| 5.2.3 铌酸钾钠压电植入材料的制备 |
| 5.2.4 激光辐照加工微区结构 |
| 5.2.5 材料理化性质表征 |
| 5.2.6 材料调控选区矿化性能表征 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 材料仿生矿化性能 |
| 5.3.2 材料表面微区结构的构建与表征 |
| 5.3.3 材料表面微区结构选区仿生矿化 |
| 5.4 小结 |
| 结论 |
| 论文的创新性 |
| 工作展望 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 附件 |
（9）CD443’ UTR增强自然杀伤细胞对肝癌肿瘤干细胞杀伤作用的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 CD44影响NK细胞识别杀伤肝癌干细胞 |
| 1 引言 |
| 2 实验材料 |
| 3 实验方法 |
| 4 结果 |
| 5 讨论 |
| 第二章 CD44 3'UTR调控ULBP2 mRNA稳定性 |
| 1 引言 |
| 2 实验材料 |
| 3 实验方法 |
| 4 结果 |
| 5 讨论 |
| 第三章 CD44 3'UTR竞争性结合miRNA-34a调控ULBP2表达 |
| 1 引言 |
| 2 实验材料 |
| 3 实验方法 |
| 4 结果 |
| 5 讨论 |
| 第四章 CD44 3'UTR增敏NK细胞识别杀伤肝癌干细胞 |
| 1 引言 |
| 2 实验材料 |
| 3 实验方法 |
| 4 结果 |
| 5 讨论 |
| 全文总结与展望 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 中英文缩略词简表 |
| 攻读博士期间的成果 |
| 致谢 |
（10）rhPDGF-BB基因修饰的BMSCs促进大鼠股骨牵张成骨的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 大鼠单侧股骨牵张成骨动物模型的建立 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 实验试剂 |
| 1.2 实验设备 |
| 1.3 实验动物及伦理 |
| 1.4 单边可延长式微型外固定架的设计与研制 |
| 1.5 大鼠股骨牵张成骨模型的建立 |
| 1.6 观察与检测指标 |
| 1.7 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二部分 大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养、鉴定及慢病毒介导RHPDGF-BB体外转染 |
| 1 内容与方法 |
| 1.1 实验材料与试剂 |
| 1.2 实验设备 |
| 1.3 实验动物 |
| 1.4 实验方法 |
| 1.5 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三部分 rh PDGF-BB基因转染BMSCS促进大鼠股骨牵张成骨区新生骨矿化的作用 |
| 1 内容与方法 |
| 1.1 实验试剂 |
| 1.2 实验设备 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 实验动物及分组 |
| 1.5 观察与检测指标 |
| 1.6 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间获得的学术成果 |
| 个人简历 |
| 导师评阅表 |
四、以研究成保持干细胞活性的新方法（论文参考文献）
- [1]FGD5维持乳腺发育以及促进基底样乳腺癌发生发展的作用及机制研究[D]. 张婷婷. 北京协和医学院, 2021(02)
- [2]细胞光遗传学操控与同步传感检测的技术开发与应用研究[D]. 张宪明. 浙江大学, 2021(01)
- [3]调控Wnt和Activin/Nodal信号高效建立和悬浮扩增人多能干细胞[D]. 牛宝华. 昆明理工大学, 2021(02)
- [4]仿生液晶态氧化石墨烯/多糖复合体系的构建及其对hBMSCs生物学行为的影响[D]. 孙凯. 暨南大学, 2020(05)
- [5]兼具促成骨及抗菌性能钛基植入体表面改性及其生物学评价[D]. 陶白龙. 重庆大学, 2020
- [6]基于丝蛋白纳米纤维的材料仿生设计及促进组织再生的研究[D]. 丁召召. 苏州大学, 2020(06)
- [7]3D打印器件与微流控技术的肿瘤微环境系统生物学分析[D]. 刘杨. 北京科技大学, 2020(01)
- [8]电信号响应性铌酸钾钠基植入材料及其生物学性能研究[D]. 翟锦霞. 华南理工大学, 2020
- [9]CD443’ UTR增强自然杀伤细胞对肝癌肿瘤干细胞杀伤作用的机制研究[D]. 翁骏. 南方医科大学, 2020
- [10]rhPDGF-BB基因修饰的BMSCs促进大鼠股骨牵张成骨的研究[D]. 买买艾力·玉山. 新疆医科大学, 2020(07)