一、3种方法对脂肪细胞损伤程度的人体实验研究（论文文献综述）
周峰[1]（2020）在《IL-17及炎症相关因子在脂肪组织中的表达》文中指出目的检测IL-17及炎症相关因子在小鼠脂肪组织中的表达,探讨IL-17在肥胖所致炎症反应中的作用。方法选取40只3周龄健康雄性C57BL/6小鼠,随机分为普通饲料组（对照组）、高脂饲料组（肥胖组）、高脂饲料+抗IL-17抗体组（肥胖+抗IL-17组）、高脂饲料+Ig G抗体组（肥胖+Ig G组）,每组10只。分别喂养普通饲料和高脂饲料,肥胖+抗IL-17组和肥胖+Ig G组小鼠每周分别腹腔注射100μg/Kg体重的抗IL-17抗体和Ig G抗体,对照组和肥胖组分别腹腔注射等量生理盐水。喂养20周后取皮下脂肪组织,HE染色观察脂肪组织细胞形态和炎症因子浸润情况,免疫荧光法检测脂肪组织中巨噬细胞标志物F4/80,荧光定量PCR检测皮下脂肪组织中MCP-1、TNF-α、IL-17、IL-17RA等炎症因子的m RNA水平,Western Blotting和ELISA法检测皮下脂肪组织中IL-17和IL-17RA蛋白表达,免疫组织化学法测定皮下脂肪组织中IL-17、TNF-α和IL-1β蛋白表达和定位。结果1肥胖组小鼠脂肪组织中IL-17及IL-17RA蛋白表达高于其余3组（p<0.05）。2肥胖组皮下脂肪组织中炎性细胞浸润较其余3组明显（p<0.05）,肥胖+Ig G组炎性细胞浸润减轻,而肥胖+抗IL-17组炎性细胞浸润改善不明显。3免疫荧光检测结果显示肥胖组巨噬细胞聚集明显,高于其余3组（p<0.05）,而肥胖+抗IL-17组及肥胖+Ig G组与对照组之间差异均无统计学意义。4荧光定量PCR结果显示,肥胖组小鼠脂肪组织中MCP-1、TNF-α、IL-17、IL-17RA等炎症因子m RNA水平均高于其余3组（p<0.05）。5免疫组织化学结果显示IL-17、TNF-α及IL-1β蛋白表达趋势一致,即肥胖组、肥胖+抗IL-17组、对照组及肥胖+Ig G组依次降低,除肥胖+抗IL-17组与对照组间差异无统计学意义外,其余各组间差异均有统计学意义。结论1肥胖小鼠脂肪组织中IL-17及相关炎症因子表达增加;2抗IL-17抗体可以减轻脂肪组织中巨噬细胞的募集,抑制脂肪组织中炎症因子表达,减轻肥胖引起的慢性炎症反应。图10幅;表4个;参91篇。
郑波[2]（2020）在《热挤压3D打印构建大米淀粉-儿茶素复合物的消化性能及抗肥胖机理研究》文中认为随着经济的快速增长和疾病谱的不断演变,由于过度能量摄入和消耗不平衡导致的肥胖症与日俱增,已成为威胁人类健康和社会发展不可忽视的世界性公共卫生问题。而基于膳食干预理念设计具有个性化健康食品实现对肥胖的防御与治疗,已成为当今食品营养科学领域的研究前沿和热点。本论文考察了目前国内外对肥胖症营养干预研究的现状,及热挤压3D打印技术个性化营养食品定制的特点和发展趋势,提出利用热挤压3D打印协同儿茶素分子相互作用调控大米主要营养成分大米淀粉的消化性能和营养功能,深入系统研究所构建的大米淀粉-儿茶素复合物（3DP-REC）的抗酶解机理和抗肥胖机制,以期从新的视觉设计健康主食等淀粉类食品。研究具有前沿性和重要的科学意义,对热挤压3D打印技术应用于健康淀粉类食品的个性化定制及膳食干预防治肥胖起到积极的促进作用。采用现代结构表征技术和分子动力学模拟方法,阐明3DP-REC结构演变与抗消化性能的关系及其抗酶解机理。结果显示,热挤压3D打印可增加糊化大米淀粉的单螺旋结构、双螺旋结构、相对结晶度、纳米聚集体有序结构和表面短程有序结构,减少无定形结构,提高整体结构有序化程度;儿茶素分子的引入一方面通过疏水作用力进入直链淀粉螺旋空腔形成单螺旋复合物和V型结晶结构,及与淀粉分子发生氢键相互作用,导致形成新的双螺旋结构、纳米聚集体有序结构和局部排列致密结构等短程有序结构,进一步增加大米淀粉结构的有序化。结构有序化的提高即分子链排列更加致密能有效阻碍胰α-淀粉酶在淀粉分子中的迁移和结合,促进SDS和RS生成;另一方面3DP-REC无定形结构区域中儿茶素分子与淀粉分子形成结合力较弱的以π-π为主导、氢键为辅的相互作用,在消化环境中易发生解离,游离儿茶素与胰α-淀粉酶的Trp59位点发生结合,屏蔽淀粉与胰α-淀粉酶特异结合的正构活性位点,起到酶抑制剂的作用。可见,3DPREC的抗酶解机理为通过演变形成长程有序和短程有序结构及儿茶素解离成酶抑制剂,协同作用有效阻隔胰α-淀粉酶的降解,从而降低RDS含量,提高SDS和RS含量。结合脂质组学及肝脏转录组学等方法,从基因水平揭示不同儿茶素添加量（2.5%、5%和7.5%）的3DP-REC对高脂膳食肥胖受试鼠的抗肥胖作用机制。研究发现,3DPREC干预是通过调节肝脏糖脂代谢通路中关键基因的表达促进肝脏糖原生成和胰岛素分泌,促进脂肪酸β-氧化、肝脏胆汁酸合成、抑制脂肪酸合成及胆固醇合成来显着降低机体血糖水平,及通过降低血清磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、甘油三酯、神经酰胺、磷脂酰甘油、鞘胺醇等脂质合成改善血脂水平,从而有效抑制脂质沉积,抵御由高脂膳食引起的肥胖。此外,3DP-REC干预还可下调促炎关键基因改善肝功能代谢紊乱、炎症状态、氧化应激和由炎症引起的组织损伤。除血糖外其余的上述改善作用随3DP-REC中儿茶素含量增加而增强,3DP-7.5%REC的干预效果最佳,达到正常组水平。利用16S r RNA高通量测序等方法进一步探究3DP-REC干预对高脂膳食肥胖大鼠肠道微生态的影响及与抗肥胖的关系。结果显示,3DP-REC干预显着改善由高脂膳食引起的结肠组织损伤,通过促进胃肠道激素的表达及降低肠道中总胆汁酸水平能有效降低能量摄入和抑制脂质沉积,且干预效果存在对3DP-REC中儿茶素含量的依赖性;3DPREC干预还可促进肠道中如乳杆菌属和双歧杆菌属等有益菌的丰度,改善肠道菌群结构,尤其是通过促进产短链脂肪酸菌的生长繁殖显着提高肠道中丙酸和丁酸的含量,其中3DP-2.5%REC干预显着提高丁酸含量,3DP-5%REC干预显着提高丙酸含量;KEGG功能预测结果显示,3DP-REC干预可通过激活产热功能、调节蛋白质代谢通路等防止脂质沉积;对3DP-REC干预后差异菌群变化与机体生理代谢指标的相关性分析发现,3DPREC进入结肠后通过有效抑制Romboutsia等有害菌的生长代谢,促进Veillonella、Butyricicoccus、Ruminococcaceae、Bifidobacterium等产丙酸和丁酸有益菌的繁殖,实现对机体由高脂膳食引起的血脂紊乱、肝功能代谢异常和氧化应激损伤的改善。基于上述结果初步建立了“REC膳食干预-肠道菌群结构-肥胖相关代谢生化指标”的相互影响关系。融合TSE能量代谢监测及分子生物学方法,阐明3DP-REC对棕色脂肪组织产热功能的影响及调节能量代谢和抗肥胖作用的机制。研究表明,3DP-REC干预可显着促进棕色脂肪及米色脂肪组织中脂质分解相关关键酶和基因的表达和加快脂质分解速率,为线粒体提供能量从而显着提高UCP1蛋白的表达,激活棕色脂肪的产热功能,提高机体的能量消耗,增加静息状态下的基础代谢,改善由高脂膳食引起的胰岛素抵抗继而有效抵御脂肪沉积,降低机体体重和体脂肪含量,最终达到抗肥胖的效果。而其中干预促进室温下机体产热的效果随3DP-REC中儿茶素的含量增加趋势更为明显。上述研究表明利用热挤压3D打印协同儿茶素复合作用可有效调控大米淀粉的抗消化性能,所构建的3DP-REC具有很好的抗肥胖作用及营养功能,所获得的研究结果和提出的机理具有很好的学术价值,可望为实现个性化营养健康淀粉类食品的创制提供新的设计思路和理论指导。
许皖[3]（2020）在《葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠保护作用的实验研究》文中研究指明研究背景:“酒精滥用”和“酒精依赖”是造成酒精性肝病高发病率和死亡率的主要危险因素,已成为仅次于病毒性肝病的第二大肝病,严重危害人类健康。酒精性肝脏疾病是由急性或慢性饮酒引起的肝脏代谢疾病,早期以单纯性脂肪肝病变为主,继而向脂肪性肝炎、肝纤维化、肝硬化和肝癌等不可逆病变发展。尽管酒精性肝脏疾病对全球的经济和健康产生了深远的影响,但目前对于该病治疗药物的研究进展甚微,除戒酒和营养支持外,尚无令人满意的治疗策略。酒精性肝病当属中医“酒疸”、“酒痨”、“酒癖”、“酒臌”、“伤酒”、“酒中毒”等范畴。急性酒精性肝损伤的发生,主要是由于酒食不节,酒毒湿热之邪蕴阻中焦,继而伤及脾胃,致运化失司,水湿失运,变生痰浊,而后湿热搏结,阻滞中焦或土雍木郁,致肝脾同病。其病位在肝,涉及胆、脾、胃,酒毒湿热之邪蕴结体内是根本病机。葛花和枳椇子为我国传统解酒中药,古代医药文献有对两药同用解酒毒的记载。葛花发散宣透,引湿热从肌表而散枳椇子渗泄利尿,使湿热之邪从小便而下,二者配伍,散渗结合,分消湿浊,因势利导,使酒湿邪气排出体外,起到解酒保肝的作用。课题组前期已经完成单味中药葛花、枳椇子对急性酒精中毒性治疗,并进行了葛花枳椇子不同比例配伍对慢性酒精性肝损伤的实验研究,研究明确了二者配伍对酒精性肝损伤显示出一定的防治作用,可以不同程度地改善相关指标,起到解酒护肝的作用。研究目的:酒精性肝损伤是全球亟待解决的公共卫生问题之一,是疾病晚期难以治愈的进行性疾病,若早期阶段能及时防治,可阻止其向不可逆病变发展,故防治急性酒精性肝损伤尤为迫切,但目前相关研究较薄弱。乙醛介导的毒性,氧化应激和脂质代谢失衡通常认为与酒精性肝病的发病密切相关。转录因子Nrf2是防治氧化应激介导疾病的关键治疗靶标,Keap1-Nrf2-ARE信号通路是调控细胞保护酶的关键调节剂,在酒精性肝损伤的早期发挥着重要作用。故本课题在前期研究的基础上,以葛花和枳椇子配伍为研究对象,开展二者配伍对酒精引起的急性肝脏损伤保护作用的实验研究。采用白酒灌胃复制动物模型,动态观察肝损伤情况,通过生物化学、组织病理学、分子生物学等技术方法,探讨二者配伍能否激活Keap1-Nrf2-ARE通路诱导抗氧化酶活性而保肝。中医理论认为急性酒精性肝损伤的发生,主要是由于湿热毒邪蕴结体内,损伤及脾,致脾之运化功能失司,累及肝胆,诱发“伤酒”。越来越多的证据显示,水通道蛋白AQPs的正常表达可能是运化水湿,津液输布,维持体内水代谢稳态的分子生物学基础,而AQP表达异常可能是湿热证病理机制之一。酒精诱导的氧化应激在急性酒精性肝病的早期阶段发挥着重要作用,是引发脂质代谢异常,促进脂质过氧化,造成肝脏脂质蓄积的关键因素。水甘油通道蛋白AQP9是参与甘油和甘油三酯代谢的重要通道蛋白,在调控脂质代谢,维持甘油代谢平衡方面发挥着重要作用。故本研究同时尝试结合中医发病机制,探讨二者配伍能否影响水-甘油通道蛋白AQP9表达而调节肝中脂质代谢,从而研究药物对急性酒精性肝损伤的保护作用,为临床用药提供科学依据,并为开展其他酒精性相关疾病的研究提供思路和借鉴。研究方法:1.葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠乙醇代谢的影响:小鼠按体重随机分成模型组、阳性对照药（水飞蓟宾）组、葛花组、枳椇子组、葛花枳椇子配伍Ⅰ（1:1）组、葛花枳椇子配伍Ⅱ（1:2）组、葛花枳椇子配伍Ⅲ（2:1）组,共计7组,每组15只。采用56%（V/V）红星二锅头白酒,一次大量灌胃（模型Ⅰ组）和连续多次灌胃（模型Ⅱ组）两种方法复制急性酒精性肝损伤动物模型。根据酒精在体内的代谢特点,分别于酒后不同时间点（1h、4h和10d）取材,运用顶空气相色谱法和紫外-可见分光光度法检测血液中乙醇浓度和肝中乙醇脱氢酶活性。2.葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠肝脏功能、血脂水平和肝组织病理形态的影响:小鼠按体重随机分成空白组、模型组、阳性对照药（水飞蓟宾）组、葛花组、枳椇子组、葛花枳椇子配伍Ⅰ（1:1）组、葛花枳椇子配伍Ⅱ（1:2）组、葛花枳椇子配伍Ⅲ（2:1）组,共计8组,每组15只。采用56%（V/V）红星二锅头白酒,一次大量灌胃（模型Ⅰ组）和连续多次灌胃（模型Ⅱ组）两种方法复制急性酒精性肝损伤动物模型。根据血清酶学改变特点,分别于酒后不同时间点（4h、6h、12h、16h和10d）取材,检测肝功能（ALT、AST、ALP、ALB和TP含量）、血脂水平（TG和CHO含量）及肝组织形态变化。3.葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠肝脏组织氧化应激的影响:运用紫外分光光度法检测酒后不同时间点（4 h、6 h、12 h、16 h和10 d）小鼠肝脏组织中SOD、MDA和GSH的吸光度,荧光分光光度法测定肝组织中ROS的吸光度,并计算其在组织中的活力。4.葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠保护作用机制的探讨:运用RT-PCR和Western blot方法,分析检测酒后不同时间点（12 h和10 d）小鼠肝脏组织中Keap 1、Nrf2和AQP9 mRNA和蛋白表达水平。研究结果:1.葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠血液乙醇浓度与肝中乙醇脱氢酶的影响:①酒精性肝损伤模型Ⅰ组小鼠（酒后1h和4h）:与模型组相比,葛花、枳椇子及各配伍组（1:1、1:2和2:1）均显着降低血液中乙醇浓度,并升高肝脏乙醇脱氢酶活性,其中葛花-枳椇子（2:1）组在促进乙醇的代谢方面具有较好的治疗作用,显现出较好的解酒作用。②酒精性肝损伤模型Ⅱ组小鼠（酒后10d）:与模型组相比,葛花、枳椇子及各配伍组（1:1、1:2和2:1）血清中乙醇含量显着降低,肝组织中乙醇脱氢酶活性增强,即各给药组通过调控ADH脱氢酶系统,促进乙醛的消除,并减轻乙醇诱导的肝脏损伤,显现出一定的解酒作用。其中,葛花-枳椇子（2:1）组在加速酒精代谢方面,显现出较好的治疗作用,具有出较好的解酒作用。2.葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠肝脏功能与肝组织病理形态学的影响:①酒精性肝损伤模型Ⅰ组小鼠（酒后4h、6h、12h和16h）:与空白组相比,模型组小鼠血清AST、ALT和ALP水平显着升高,TP和ALB含量显着降低,光镜下肝小叶和肝索结构紊乱,肝细胞水肿或空泡变性,并伴有炎性细胞浸润、脂肪滴的形成,即酒精造成肝脏组织及功能受损,提示模型复制成功。与模型组相比,葛花、枳椇子及各配伍组（1:1、1:2和2:1）均可显着降低小鼠血清中AST、ALT和ALP水平,升高小鼠血清TP和ALB含量,从而改善小鼠的肝脏功能。葛花-枳椇子（2:1）组在改善酒精（酒后12h）造成的肝脏血清转氨酶及肝脏蛋白质合成功能异常方面优于其它各给药组。此外,各给药组均不同程度地改善酒精诱发的微泡样脂肪变性、脂质滴积聚、肝细胞水肿和炎性损伤等病理改变,对酒精诱发的急性肝损伤具有保护作用。②酒精性肝损伤模型Ⅱ组小鼠（酒后10 d）:与空白组相比,模型组小鼠血清ALT、AST和ALP含量显着升高,TP和ALB水平明显降低,表明酒精引起小鼠肝脏功能异常,造成了急性肝脏损伤。与模型组相比,葛花、枳椇子及各配伍组（1:1、1:2和2:1）均不同程度地改善肝脏功能和蛋白合成功能。葛花-枳椇子（2:1）组在改善肝脏功能及蛋白合成功能方面优于其它各给药组,即该配伍组对酒精诱导的肝损伤具有较好的肝保护作用。此外,各给药组均不同程度地改善酒精诱发的肝细胞肿胀、微泡样脂肪变性、炎性细胞浸润和脂质滴积累等病理变化。3.葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠血脂水平及其作用机制的影响:①酒精性肝损伤模型Ⅰ组小鼠（酒后4h、6h、12h和16h）:与空白组相比,模型组小鼠血清TG和CHO水平显着升高,即酒精造成小鼠血脂功能的异常。与模型组相比,葛花、枳椇子及各配伍组（1:1、1:2和2:1）均显着改善血清脂质代谢紊乱。葛花-枳椇子（2:1）组在降低酒精（酒后12h）引起的血清TG和CHO水平升高方面优于其他各给药组。此外,葛花、枳椇子及其各配伍组（1:1、1:2和2:1）均能抑制AQP9的表达,减少肝细胞对甘油的摄入,改善脂质代谢,从而有效缓解肝脏脂肪变性,起到保护肝脏的作用。各给药组在调控AQP9表达,缓解酒精引起的脂质代谢异常方面,均无显着差异。②酒精性肝损伤模型Ⅱ组小鼠（酒后10 d）:模型组小鼠血清TG和CHO水平显着高于空白组,即急性酒精摄入造成小鼠脂质代谢紊乱。葛花、枳椇子及各配伍组（1:1、1:2和2:1）均显着降低血清TG和CHO的水平,并抑制AQP9的表达,对酒精造成的血脂异常具有一定的改善作用,起到保护肝脏的作用。葛花-枳椇子（2:1）组在改善急性酒精摄入造成的高脂血症方面优于其他各给药组,即该配伍组在减少肝脂质积累,缓解脂质代谢异常方面显现出较好的治疗作用。4.葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠肝脏氧化与抗氧化平衡及其作用机制的影响:①酒精性肝损伤模型Ⅰ组小鼠（酒后4 h、6 h、12 h和16 h）:与空白组相比,模型组小鼠肝脏SOD和GSH水平均明显降低,MDA和ROS活力均显着升高,即表明单次大剂量酒精灌胃会造成小鼠氧化应激损伤。与模型组相比,葛花、枳椇子及各配伍组（1:1、1:2和2:1）均可增强抗氧化酶活性,促进肝细胞对脂质过氧化产物的清除,即各给药组均具有抗氧化应激作用,对酒精诱导的肝脏损伤具有潜在的保护作用。其中葛花-枳椇子（2:1）组在增强抗氧化活性,抑制脂质过氧化作用,缓解酒精（酒后12 h）介导的肝细胞氧化应激损伤方面显现出较好的治疗作用,即该配伍组可显着预防酒精引起的急性肝损伤。此外,葛花、枳椇子及各配伍组（1:1、1:2和2:1）可通过抑制Keap1表达,激活Nrf2表达,从而有效地抑制自由基的产生和脂质过氧化,缓解小鼠氧化应激反应,保护肝脏免受酒精诱导的肝细胞损伤。各给药组在调控Keap1-Nrf2-ARE信号传导通路,保护肝组织免受酒精诱导的氧化损伤方面,均无显着差异。②酒精性肝损伤模型Ⅱ组小鼠（酒后10 d）:与空白组相比,模型组小鼠在白酒连续灌胃10天后,肝脏SOD和GSH活性均明显降低,MDA和ROS含量均显着升高,即表明连续大量酒精摄入会造成小鼠氧化应激损伤。与模型组相比,葛花、枳椇子及各配伍组（1:1、1:2和2:1）均通过激活Keap1-Nrf2-ARE信号通路,增强肝脏内抗氧化酶的表达（SOD和GSH）,加快脂质过氧化物（MDA和ROS）分解代谢,减少酒精对小鼠肝组织的损害。此外,葛花-枳椇子（2:1）组在增强小鼠抗氧化能力,减轻脂质过氧化作用,改善氧化应激诱导的细胞损伤方面优于其他各给药组,即该配伍组对缓解酒精诱导的肝损伤表现出积极作用。研究结论:综上所述,本研究证实葛花、枳椇子及各配伍组（1:1,1:2和2:1）对酒精诱导的急性肝损伤具有保护作用。首先,各给药组通过激活Keap1-Nrf2-ARE信号通路,增强抗氧化酶活性,减轻脂质过氧化作用,改善氧化应激诱导的细胞损伤,从而缓解酒精对小鼠的肝脏损害,发挥保护肝脏的作用。其次,各给药组通过调控水-甘油通道蛋白AQP9的表达,降低甘油的渗透性,减少甘油的摄入,改善肝脏脂质代谢异常,从而缓解酒精诱导的氧化应激和肝脂肪变性,起到保护肝细胞的作用。值得注意的是,葛花-枳椇子（2:1）组在促进酒精代谢,改善肝脏功能,减轻肝脏脂肪变性,提高小鼠抗氧化能力方面显现出积极作用,即该配伍组对酒精诱导的肝脏损伤具有较好的保护作用。因此,本研究证实葛花枳椇子配伍对急性酒精性肝损伤显示出一定的防治作用,并明确了二者配伍产生相须为用、协同增效的功用,具有增强解酒保肝的效果,是治疗酒精性肝病的天然解酒保肝药物,为临床应用葛花枳椇子防治急性酒精性肝损伤提供了科学依据。
王逗逗[4]（2020）在《清热药治疗2型糖尿病用药规律及其对调节肠道菌群作用机制研究》文中研究说明研究目的1.通过对中医古代医籍和现代文献治疗糖尿病相关方剂进行数据挖掘,研究古今医家运用清热药治疗糖尿病的组方用药规律和特点。同时,通过《医方类聚》与《中华医典》对比研究,揭示《医方类聚》作为大型方剂学类书的临床价值。2.通过对现代临床医案进行数据挖掘,揭示赵进喜教授治疗2型糖尿病（T2D M）常用清热药种类与配伍规律,常用剂量及针对不同热证证候的常用方药,以期为临床应用清热药治疗T2DM提供思路与借鉴。3.基于肠道菌群理论,通过Illumina Miseq PE300测序平台与技术,从生物分类学“属”水平探寻清热药降糖功效的微生物学靶点,以期揭示典型清热药黄连降糖的作用机制。研究方法1.文献研究部分,古代文献研究,针对《医方类聚·消渴门》全篇及《中华医典》治疗消渴相关的方药进行整理。首先对药物四气、五味、归经、方剂剂型及高频药物进行统计,并以具有清里热功效的药物为清热药纳入标准对含清热药的方剂进行筛选,统计其中的全部清热药。采用关联规则、聚类分析方法,研究古人应用清热药治疗消渴相关的配伍规律。现代文献研究,采用特定检索式,检索出中国知网、万方、维普数据库与中医药治疗T2DM相关的文献,按纳排标准筛选文献。采用频次分析方法对药物四气、五味、归经、方剂的剂型及高频药物进行统计,并以具有清里热功效的药物为清热药纳入标准对含清热药的方剂进行筛选,统计其中的全部清热药。采用关联规则、聚类分析方法,研究现代医家应用清热药治疗T2DM的配伍规律。并进一步研究治疗T2DM常用清热药的常用剂量。2.临床研究部分,收集396份赵进喜教授诊治T2DM有效医案。首先对患者症状、舌象、脉象的表述进行标准化,对处方药物的名称进行规范化,并建立医案方剂数据库。继之对患者一般情况、处方中单味药物、药物四气、五味、归经进行统计分析。采用中国中医科学院研发的中医传承辅助平台软件（version 2.5）,以关联规则、复杂熵聚类分析及无监督熵层次聚类分析法,并以具有清里热功效的药物为清热药纳入标准,挖掘赵进喜教授应用清热药治疗T2DM的组方配伍规律。并针对不同热证常用清热药的用药特色及用药剂量进行统计分析。3.实验研究部分,采用18只自发性基因缺陷型T2DM模型小鼠（db/db小鼠）,随机分为模型组、黄连组、二甲双胍组,采用6只同窝非糖尿病小鼠（db/m小鼠）为正常组。其中黄连组与二甲双胍组分别给予黄连浸膏水溶液及二甲双胍水溶液,模型组与正常组给予纯净水,干预时间为8周。实验过程中观察小鼠血糖与体重的变化。于第8周处死前采集粪便样品,通过Illumina Miseq PE300测序平台,以silval32/16sb acteria为物种分类数据库,对样品菌落的16S rDNA V3-V4区进行DNA测序与聚类,深入分析肠道菌群在生物分类学“属”水平上的组成结构、丰度及物种多样性的变化。研究结果1.文献研究结果显示,古代医家治疗消渴相关的药物,药性以寒性为主,药味以甘味、苦味为主。归经以肺经、胃经为主。剂型以汤剂、丸剂、散剂为主。常用清热药为天花粉、麦冬、黄连、知母、生地黄、甘草、石膏、黄芩、地骨皮等。关联分析结果显示,支持度及置信度均较高的规则有黄芩、麦冬,地骨皮、麦冬,知母、黄连、麦冬,麦冬、黄芪、人参等。核心药物组合为天花粉、黄连、麦冬、人参。基于聚类分析共得到6组潜在新处方配伍组合,如天花粉、麦冬、知母、黄芩、桑白皮、地骨皮、葛根、升麻、茯神、赤茯苓、生姜、竹叶、炙甘草,黄连、天花粉、王瓜根、牡蛎、苦参、鸡内金、铅丹等。现代文献研究结果显示,现代医家治疗T2DM的药物,药性以寒性为主,药味以甘味、苦味为主。归经以脾经、肺经为主。剂型以汤剂、胶囊剂为主。常用清热药为生地黄、黄连、天花粉、麦冬、玄参、知母、甘草、赤芍等。关联分析结果显示,支持度及置信度均较高的规则有生地黄、黄芪,丹参、黄芪,生地黄、丹参、黄芪等。核心药物组合为天花粉、黄连、麦冬、生地黄、黄芪、山药、葛根、丹参。基于聚类分析得到5组潜在新处方配伍组合,如栀子、黄芩、黄芪、玄参、丹参,玄参、白术、茯苓、山茱萸、泽泻、牡丹皮等。2.现代临床医案分析结果显示,共纳入396份医案,含396首处方。症状统计由多到少依次为乏力、口干、不寐、口苦、腰酸等。证候以郁热证、阴虚证、气虚证最多,血瘀证、郁热证次之,热证及其密切相关证候（郁热证、阴虚证、结热证、痰热证、湿热证、肝阳证、热毒证）占总证候的50.66%。用药方面,药物药性以寒性为主。药味以苦味、甘味为主。归经以肝经、脾经为主。常用清热药为黄芩、黄连、地骨皮、甘草、夏枯草、赤芍、生地黄、牛蒡子、知母等。关联分析结果显示,支持度及置信度均较高的规则有葛根、丹参,地骨皮、荔枝核,地骨皮、丹参、仙鹤草、荔枝核,葛根、丹参、柴胡、黄芩,陈皮、黄芩、半夏等。核心药物组合为葛根、丹参、柴胡、黄芩、白芍、黄连、地骨皮、鬼箭羽、荔枝核、仙鹤草。基于复杂熵聚类分析得到潜在核心药物组合8组,如麦冬、五味子、太子参,白芍、赤芍、甘草,地骨皮、仙鹤草、荔枝核、蚕沙等。基于无监督熵层次聚类分析获得4首潜在新处方配伍组合,如麦冬、莲子心、莲子、五味子、太子参,白芍、赤芍、甘草、三七、茺蔚子、密蒙花等。通过对热证及其密切相关证候用药统计,得到各证候常用清热药,如郁热证常用黄芩、夏枯草、赤芍;阴虚证常用地骨皮、生地黄、知母、玄参;热毒证常用黄芩、黄连、金银花、连翘、蒲公英等。3.动物实验研究结果显示,给予黄连的自发性基因缺陷型T2DM小鼠（黄连组）血糖指标显着下降,与给予纯净水的自发性基因缺陷型T2DM小鼠（模型组）及给予二甲双胍的自发性基因缺陷型T2DM小鼠（二甲双胍组）相较差异均具有统计学意义,（P=0.002,P=0.033）。各组小鼠体重均较实验前增加,模型组、黄连组、二甲双胍组,三组小鼠体重与作为正常组的非糖尿病小鼠相较均具有显着差异（P值均=0.000）,三组小鼠组间数据则均无显着差异（P值均>0.05）。基于16S rDNA测序结果显示,与模型组相较,黄连组小鼠肠道菌群丰度及多样性降低,在生物分类学“门”水平上,Bacteroidetes、Proteobacteria、Cyanobacteria、Verrucomicrobia 丰度增加,而 Fir micutes、Actinobacteria、Patescibacteria、Epsilonbacteraeota、Tenericutes、Deferribacter es丰度降低,提高了 Bacteroidetes/Firmicutes比值;在生物分类学“属”水平上,表现为 Akkermanisia 丰度增加,Alistipes、Blautia、Roseburia、Helicobacter、Papillibacte r、Ruminococcaceae丰度降低。肠道菌群对血糖影响的相关性分析显示,Akkermansia与血糖呈负相关性,具有统计学意义（P=0.00026;Q=0.00866）。结论1.文献研究显示,古代医家治疗消渴多以清热药为主,常配伍补气药与补阴药。常用清热药为天花粉、黄连、知母等。与古代医家相较,现代医家治疗T2DM重视应用清热药的同时,常配伍活血化瘀药,常用清热药为生地黄、黄连、天花粉等。2.现代临床案例分析显示,T2DM常见热证为郁热证、阴虚证、结热证。赵进喜教授治疗T2DM常用清热药为黄芩、黄连、地骨皮、夏枯草等。常配合健脾益气、养阴生津、活血化瘀、疏肝理气、燥湿化痰等药物与清热药联用。3.实验研究显示,清热药的代表药黄连的降糖机制可能与其增加Akkermansia菌属丰度,降低 Alisipes、Blautia、Helicobacter、Papillibacter、Roseburia、Ruminococcac eae菌属丰度,从而改善肠道菌群组成结构,降低物种多样性有关。鉴于中药多靶点的作用机制,清热药治疗T2DM的作用机制还有待于进一步深入研究。4.传统医学在泰国的研究水平相对薄弱,进一步将中医药防治T2DM相关的研究成果推广到泰国,将有利于提高泰国中医诊治T2DM的临床水平。
陈宁[5]（2020）在《基于RhoA/ROCK通路探讨逐瘀壮骨汤干预激素性股骨头坏死的实验研究》文中进行了进一步梳理研究一逐瘀壮骨汤对大鼠激素性股骨头坏死的干预作用目的:实验通过建立大鼠激素性股骨头坏死动物模型,并对大鼠进行逐瘀壮骨汤药物灌服后,观察大鼠血液中骨钙素、甘油三酯含量及股骨头组织HE染色情况,以此探讨逐瘀壮骨汤对大鼠激素性股骨头坏死的干预作用。方法:通过在SD大鼠臀肌注射皮质类固醇激素的方法,建立大鼠激素性股骨头坏死动物模型,将90只SD大鼠随机平分为空白组（n=30）、模型组（n=30）、治疗组（n=30）,每组各30只,模型组及治疗组醋酸泼尼松龙注射液20mg/kg/只,同时臀肌注射青霉素8万单位/只,庆大霉素4万单位/只,每周3次,连续3周。3周后通过HE染色观察大鼠股骨头组织,确定模型建立成功后,参照大鼠用药及体表面积计算公式后得出,治疗组每只SD大鼠每天灌服逐瘀壮骨汤2.01ml,其余各组灌服等剂量生理盐水。灌服8周后,采集大鼠颈静脉血液检测血清OCN、TG含量,取出大鼠股骨头组织进行HE染色镜下观察,观察股骨头组织骨结构及骨细胞数量情况,以分析逐瘀壮骨汤对大鼠激素性股骨头坏死的干预作用。结果:与模型组含量相比,其余各组大鼠血清OCN含量有显着性提升（P<0.01）,而血清TG含量有显着性下降（P<0.01）;HE染色结果显示,模型组大鼠股骨头软骨下区骨小梁形态出现破坏,骨小梁体积分数、骨小梁厚度及数量均较空白组低。空白组股骨头软骨下骨小梁紧凑精密,成骨细胞核小,着色深,嗜碱性,胞体呈梭形,单层排列,胞质不清,埋于骨质中,骨陷窝空虚情况较少。模型组软骨下骨骨小梁疏松,排列不整齐,个别处有断裂现象,成骨细胞较少,与空白组比较,模型组空骨陷窝率有显着性增多（P<0.01）。治疗组骨小梁破坏情况较模型组有显着改善,骨小梁体积分数、骨小梁厚度及数量也较模型组有较大提升,骨小梁排列较模型组有较大改观,骨细胞增多,结构可,与模型组对比,空骨陷窝率有显着性减少（P<0.01）。结论:逐瘀壮骨汤可显着提高激素性股骨头坏死大鼠血清OCN的含量,降低血清TG含量,促进大鼠激素性股骨头坏死骨的骨小梁修复,改善股骨头软骨下结构,提高股骨头区域成骨细胞的数量,减少骨陷窝空虚数量,对大鼠激素性股骨头坏死有较好的治疗效果。研究二逐瘀壮骨汤对激素诱导大鼠BMSCs增殖及分化的影响目的:研究逐瘀壮骨汤对激素诱导BMSCs增殖活性及分化过程中RhoA/ROCK通路上相关因子的表达,并探讨逐瘀壮骨汤干预大鼠激素性股骨头坏死的作用机制。方法:采用离体实验方法,取SD清洁大鼠,从大鼠股骨、胫骨分离大鼠BMSCs进行体外培养并传代,同时制备大鼠逐瘀壮骨汤含药血清,体外BMSCs用地塞米松磷酸钠注射液进行干预,观察不同浓度含药血清对激素干预BMSCs的影响,CCK-8方法检测细胞增殖活力,克隆形成实验计数BMSCs克隆数目,运用碱性磷酸酶（ALP）、茜素红、油红“0”染色法,运用氧化酶、Elisa法检测细胞上清液TG、OCN表达含量,以分析BMSCs的成骨、成脂情况。PCR、Western-blot方法检测RhoA/ROCK通路及下游因子RUNX-2、OPN表达情况,并在细胞分子生物学水平分析逐瘀壮骨汤治疗大鼠激素性股骨头坏死的作用靶点及机制。结果:BMSCs体外培养后用倒置显微镜观察细胞呈梭形及螺旋状排列。将细胞分为空白组、模型组、含药血清低、中、高浓度组,空白组培养基外加入正常大鼠血清,模型组在空白组细胞培养基外加入地塞米松磷酸钠并将浓度调至10-6mol/l用以激素干预,含药血清组在模型组培养基外再加入不同浓度的逐瘀壮骨汤含药血清。CCK-8检测各组细胞总体及第24h、72h、120h、168h的0D值,结果显示:与模型组相比,其余各组细胞总体及第72h、120h、168h 0D值有显着增高（P<0.01）;与低浓度含药血清组比较,中、高浓度含药血清组细胞总体及第72h、120h、168h时0D值有显着增高（P<0.01）;与中浓度含药血清组比较,高浓度含药血清组总体及第72h、120h、168h时0D值有显着增高（P<0.01）。细胞克隆形成实验计数结果显示:与模型组相比,其余各组细胞的克隆数目均显着性增加（<0.01）,含药血清各组之间比较,与低浓度含药血清组相比,中、高浓度含药血清组细胞克隆数目有显着性增高（P<0.05）;与中浓度含药血清组相比,高浓度含药血清组细胞克隆数目无显着性差异（P>0.05）。油红“0”染色观察可见,模型组可见大片脂细胞红染,其余各组脂细胞红染程度均明显弱于模型组。脂肪细胞阳性率统计结果:与模型组相比,其余各组脂肪细胞阳性率有显着性降低（P<0.01）;与低浓度含药血清组相比,中、高浓度含药血清组脂肪细胞阳性率有显着性降低（P<0.01）;与中浓度含药血清组相比,高浓度含药血清组脂肪细胞阳性率有显着性降低（P<0.01）。细胞上清液TG含量测定结果:与模型组相比,其余各组细胞TG含量有显着性降低（P<0.01）;与低浓度含药血清组相比,中、高浓度含药血清组细胞TG含量有显着性降低（P<0.01）;与中浓度含药血清组相比,高浓度含药血清组细胞TG含量有显着性降低（P<0.05）。各组细胞成骨诱导后,ALP染色结果显示:模型组几乎未见阳性成骨细胞蓝染,其余各组ALP染色程度均高于模型组,与模型组比较,空白组、低、中、高浓度含药血清组ALP染色平均光密度均显着性增高（P<0.01）;与低浓度含药血清组比较,中浓度含药血清组ALP染色平均光密度未见明显差异（P>0.05）,高浓度含药血清组ALP染色平均光密度有显着性增高（P<0.01）。与含药血清中浓度组比较,高浓度含药血清组ALP染色平均光密度有显着性增高（P<0.01）。茜素红钙结节染色镜下可见:模型组几乎未见阳性钙结节出现,其余各组茜素红染色均有钙结节形成。钙结节染色平均光密度分析结果:与模型组相比,其余各组细胞钙结节染色平均光密度有显着性增高（P<0.01）;与低浓度含药血清组相比,中浓度含药血清组细胞平均光密度无显着性差异（P>0.05）,高浓度含药血清组细胞平均光密度有显着性增高（P<0.01）;与中浓度含药血清组相比,高浓度含药血清组细胞平均光密度有显着性增高（P<0.01）。细胞上清液OCN含量测定结果:与模型组相比,其余各组细胞OCN含量有显着性增高（P<0.01）;与低浓度含药血清组相比,中、高浓度含药血清组细胞OCN含量有显着性增高（P<0.01）;与中浓度含药血清组相比,高浓度含药血清组细胞OCN含量有显着性增高（P<0.01）。RT-PCR结果显示:与模型组相比,其余各组RhoA、ROCK-1、RUNX-2、OPN因子mRNA表达含量有显着性增高（P<0.05）;与低浓度含药血清组相比,中、高浓度含药血清组RhoA、ROCK-1、RUNX-2因子mRNA表达量有显着性增高（P<0.01）,高浓度含药血清组OPN因子mRNA表达量有显着性增高（P<0.01）,中浓度含药血清组OPN因子mRNA表达含量无显着性差异（P>0.05）;与中浓度含药血清组相比,高浓度含药血清组RhoA、ROCK-1、RUNX-2、OPN因子mRNA表达含量有显着性增高（P<0.05）。Western-Blot结果显示:与模型组相比,其余各组RhoA、ROCK-1、RUNX-2、OPN因子蛋白表达含量有显着性增高（P<0.05）;与低浓度含药血清组相比,中浓度含药血清组RhoA、ROCK-1因子蛋白表达含量无显着性差异（P>0.05）,高浓度含药血清组RhoA、ROCK-1因子蛋白表达含量有显着性增高（P<0.05）,中、高浓度含药血清组RUNX-2、OPN因子蛋白表达含量有显着性增高（P<0.01）;与含药血清中浓度组相比,高浓度含药血清组RhoA、ROCK-1、RUNX-2、OPN因子蛋白表达含量均有显着性增高（P<0.05）。结论:逐瘀壮骨汤可显着提升激素诱导BMSCs的增殖活性,其调控激素诱导BMSCs分化的机制可能是通过促进RhoA/ROCK信号通路的开放,并上调下游因子RUNX-2、OPN的表达,进而促进BMSCs的成骨分化,抑制成脂分化。
何玉[6]（2021）在《脂肪细胞结构和活性对移植后脂肪存活的影响》文中提出研究背景目前自体脂肪移植已被广泛应用于治疗软组织缺损相关疾病和美容整形手术。然而,移植脂肪的存活率不稳定仍是困扰外科医生的难题。脂肪移植物存活的机制尚不完全清楚,各种细胞在组织重塑过程中的作用尚未完成阐明。当前脂肪移植物存活的主要理论认为,移植后组织重塑是由脂肪干细胞（Adipose-derived Stem Cells,ADSCs）再生所推动的。因此目前研究重视脂肪干细胞而忽视脂肪细胞,对脂肪细胞结构与活性在移植后脂肪成活中的作用缺乏认识。本研究首先尝试获取脂肪细胞的结构和活性差异,但脂肪颗粒大小、脂肪成分、血管基质片段细胞（Stromal Vascular Fraction Cells,SVFs）的数量和活性、ADSCs的数量及功能等其他变量相同的脂肪颗粒。随后进行动物实验,分析不同脂肪颗粒动物体内移植后的体积保留、血管生成、脂肪存活等情况,探究脂肪细胞结构与活性对移植后脂肪存活的影响。最后,回顾性分析在脂肪移植手术全程中,尽可能保护脂肪细胞的结构与活性的手术方法,在自体脂肪移植乳房整形手术中的临床效果,从临床角度出发,评价保护脂肪细胞结构与活性在大容量脂肪移植中的意义。研究目的1.体外构建脂肪细胞结构和活性差异,但其他变量相同的脂肪颗粒。2.研究不同脂肪颗粒裸鼠体内移植后的脂肪存活情况,评价脂肪细胞结构与活性对移植后脂肪存活的影响。3.评价保护脂肪细胞的结构与活性的手术方法,在自体脂肪移植乳房整形手术中的临床效果。研究方法1.体外构建脂肪细胞结构和功能差异,但其他变量相同的脂肪颗粒采用脂肪抽吸术获取人脂肪颗粒（n=10）,分别用棉垫过滤法、轻柔离心法（400×g,1 min）及Coleman离心法（1200 × g,3 min）处理,所获得的脂肪样品均再次进行二次浓缩15分钟。对二次浓缩后的脂肪颗粒进行检测,评价仅有脂肪细胞结构和功能差异,但其他变量相同的脂肪颗粒是否构建成功:利用扫描电镜检测脂肪细胞的结构;利用葡萄糖转移实验比较脂肪细胞的活性;脂肪经胶原酶消化获得SVF细胞,利用Muse细胞仪检测SVF细胞的数量和活性;利用流式细胞分析仪测定其中的ADSCs的含量;利用CCK8（Cell Counting Kit8）试剂盒绘制ADSCs细胞增殖曲线,比较组间ADSCs的增殖能力;对ADSCs进行成脂、成骨、成软骨诱导分化,比较各组脂肪干细胞的多向分化能力。2.比较不同脂肪颗粒裸鼠体内移植后脂肪存活效果使用免疫缺陷小鼠构建自体脂肪移植的动物模型,于注射后2周、8周取材。比较移植物的大体观、体积保留率。并利用HE染色、免疫组织化学染色（脂周蛋白、CD31、血管内皮生长因子）方法,分析脂肪细胞存活、有效体积保持率、血管密度、细胞因子分泌等,评估移植物成活的质量。3.评价保护脂肪细胞的结构与活性的手术方法,在自体脂肪移植乳房整形手术中的临床效果。回顾性分析在脂肪移植手术全程中,尽可能保护脂肪细胞的结构与活性的手术方法,在乳房再造及假体取出即刻自体脂肪移植隆乳术中的临床效果。术后从并发症发生情况、乳房大小改变、患者满意度、第三方医生评价等方面进行手术效果评估,从临床角度出发,评价保护脂肪细胞结构与活性在大容量脂肪移植中的意义。研究结果1.第一部分不同脂肪纯化方法获取的脂肪,经二次浓缩15min处理后,组间脂肪细胞的结构与活性存在差异。而组间脂肪成分、SVF细胞数量及活性、ADSCs细胞数量与功能均无差异。说明成功构建了仅有脂肪细胞结构和活性差异,但其他变量相同的脂肪颗粒。2.第二部分（1）移植物体积保留率:移植后2周及8周取材,三组间体积保留率均无统计学差异（P>0.05）。（2）HE染色评分:脂肪细胞的结构和活性越好,移植后移植物的质量越好,表现为脂肪组织的完整性最好,空泡、坏死、纤维化和炎症程度最轻。反之,脂肪细胞的结构和活性越差,移植后移植物的质量也越差,表现为脂肪组织的完整性差,而空泡、坏死、纤维化和炎症程度重。（3）脂周蛋白免疫组织化学染色:脂肪细胞的结构和活性越好,移植后活脂肪细胞越多,有效体积保持率越高,组间具有统计学差异（P<0.05）。（4）血管计数（CD31+）:移植后2周及8周,均可发现脂肪细胞的结构和活性越好,移植物中新生血管越多,组间具有统计学差异（P<0.05）。（5）血管内皮生长因子分析:移植后2周,脂肪细胞的结构和活性越好,移植后新生血管越多,组间具有统计学差异（P<0.05）,血管内皮生长因子的变化与血管生成趋势相平行。3.第三部分（1）在自体脂肪移植乳房重建手术中,尽可能保护脂肪细胞的结构和活性,术后畸形得到很好纠正,患者满意度高,第三方医生评价好。与既往研究相比,所需手术次术少,并发症发生率低。（2）在假体取出即刻自体脂肪移植隆乳手术中,尽可能保护脂肪细胞的结构与活性,术后乳房外形自然、质地柔软,患者满意度高,第三方医生评价好。与既往研究相比,所需手术次术少,并发症发生率低。研究结论1.在第一部分的研究中,通过对不同脂肪纯化方法获取的脂肪,进行二次浓缩的方式,成功消除了组间脂肪成分、SVF细胞数量与活性、脂肪干细胞数量与功能等差异,同时保留了脂肪细胞结构与活性的差异,成功构建出仅有脂肪细胞结构和活性差异,但其他变量相同的脂肪颗粒,为进一步研究脂肪细胞结构和活性在脂肪移植中的作用创造了条件。2.脂肪细胞的结构和活性保护越好,移植物的质量越好。表现为脂肪组织的完整性高、活脂肪细胞多、新生血管多,而空泡、坏死、纤维化和炎症程度较轻。3.脂肪细胞的结构和活性保护越好,移植脂肪中功能性脂肪细胞越多,可分泌更多的促进血管生成的细胞因子,促进血管生成和移植脂肪成活。4.在脂肪移植乳房整形手术中,尽可能保护脂肪细胞的结构和活性,具有术后体积保持良好,所需手术次术少,并发症发生率低,患者满意度高,第三方医生评价好等优点。
芮仞[7]（2020）在《骨痹通消方调节OPG/RANK/RANKL系统治疗激素性股骨头坏死小鼠的实验研究》文中进行了进一步梳理目的观察骨痹通消方对激素性股骨头坏死小鼠的OPG/RANK/RANKL系统的调控作用,以探讨骨痹通消方治疗激素性股骨头坏死的疗效。方法1.建立激素性股骨头坏死动物模型:将90只SPF级别的两周龄昆明雄性小鼠随机分为两组,模型组78只,正常对照组12只,模型组注射腹腔注射脂多糖LPS（1 mg/kg）,间隔一周后再次注射一次,并臀肌注射醋酸泼尼松龙注射液（PND）（100mg/kg）,然后每3天注射一次,直到第24天。正常对照组注射相统剂量的生理盐水。造模结束后随机抽取两只模型组小鼠行磁共振检测观察股骨头坏死情况,并取两组共24只小鼠血液经ELISA法检测BALP、PINP水平,以观测是否成功建立激素性股骨头坏死模型。2.将成功建立激素性股骨头坏死模型的60只小鼠随机分为治疗组、阳性对照组、模型组三组,每组20只,加上之前的空白对照组12只,治疗组予以骨痹通消方灌胃,阳性对照组予以通络生骨胶囊,模型组和空白对照组予以等量生理盐水,共治疗12周,12周后处死所有小鼠通过荧光定量和蛋白免疫印迹测定OPG、RANK、RANKL、PLCγ2、CTSK、TRAP的表达水平。结果1.所有模型组小鼠体重均低于对照组,并有食量减少,蜷缩少动,体毛杂乱不光滑等症状,且少数小鼠出现跛行。2.磁共振显示模型组小鼠左侧髋部高信号;经ELISA法测量两组BALP、PINP含量,模型组的BALP、PINP均比正常组少,且差异具有统计学意义。3.熔解曲线均符合单峰特性,扩增曲线均符合增殖曲线特性,均呈S型,四个时期较明显;RT-q PCR检测结果得出,模型组与空白对照组相比,OPG、RANKL、RANK、PLCγ2、CTSK、TRAP的m RNA表达含量差异均十分显着（p<0.01）;与治疗组相比,OPG、PLCγ2的m RNA表达含量差异显着（p<0.05）,RANKL、RANK、CTSK、TRAP的m RNA表达含量差异十分显着（p<0.01）;与阳性对照组相比,OPG、m RNA表达含量差异显着（p<0.05）,RANKL、RANK、PLCγ2、CTSK、TRAP的m RNA表达含量差异十分显着（p<0.01）;治疗组与阳性对照组相比,除PLCγ2 m RNA含量有显着差异外,OPG、RANKL、RANK、CTSK、TRAP的m RNA表达含量均无明显差异。且模型组OPG m RNA表达含量最低,治疗组低于另外两组;模型组RANKL、RANK、PLCγ2、CTSK、TRAP的m RNA表达含量最高,治疗组高于阳性对照组,空白对照组含量最低。WB检测结果显示,模型组与空白对照组相比,OPG、RANKL、RANK、PLCγ2、CTSK、TRAP蛋白表达含量差异均十分显着（p<0.01）;与治疗组相比,OPG、RANKL、PLCγ2、CTSK蛋白表达差异显着（p<0.05）,RANK、TRAP蛋白表达含量差异十分显着（p<0.01）;与阳性对照组相比,OPG、RANKL、RANK、PLCγ2、CTSK蛋白表达含量差异显着（p<0.05）,TRAP蛋白表达含量差异十分显着（p<0.01）;治疗组与阳性对照组相比,OPG、RANKL、RANK、PLCγ2、CTSK、TRAP蛋白表达含量均无明显差异。且模型组OPG蛋白表达含量最低,治疗组与阳性对照组均低于空白对照组;模型组RANKL、RANK、PLCγ2、CTSK、TRAP蛋白表达含量最高,治疗组RANK蛋白含量低于阳性对照组,RANKL、PLCγ2、CTSK、TRAP蛋白含量均高于阳性对照组,空白对照组RANKL、RANK、PLCγ2、CTSK、TRAP蛋白含量均最低。结论1.通过脂多糖联合激素的造模方法可以成功建立SANFH病理模型,且建立的病理模型与临床过度服用激素的患者病程发展类似,可以更加直接地观测SANFH病程的发展并探索更有效率的治疗方法。2.骨痹通消方可以通过上调OPG的表达,抑制RANKL/RANK、PLCγ2、CTSK和TRAP的表达使SANFH小鼠体内OB数量增加,功能活跃,OC数量减少或功能受到抑制,并促使其凋亡,机体内骨形成增加,骨吸收减少,从而延缓甚至阻止股骨头塌陷,且骨痹通消方与通络生骨胶囊的治疗效果无统计学差异。
张睿林[8]（2019）在《蛋白核小球藻多肽调节脂质的代谢及机制研究》文中研究指明微藻被认为是蛋白质、碳水化合物、脂类和食品、医药、化妆品和能源产品色素等多种成分的新型绿色来源。蛋白核小球藻作为一种单细胞藻类,具有丰富的营养价值和药用价值。国内外对蛋白核小球藻的生物活性成分研究如多糖、多肽、糖蛋白等进行了广泛研究,本文对蛋白核活性蛋白及多肽的抗氧化及脂质代谢调节和机理进行研究,为了进一步扩展了蛋白核小球藻的食用和药用价值。利用浸泡、反复冻融、超声破碎和均质联合破碎对蛋白核小球藻细胞进行破壁处理,蛋白得率为72.4%,提取率为47.15%。将得到的蛋白进行脱色处理,对比脱色对其氧化活性影响,结果显示未脱色的蛋白具有较强的清除自由基的能力。将未脱色蛋白用四种常见酶（胃蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶）分别在各自最适条件下进行酶解处理,并测定其水解度以及分子量分布情况,结果表明胃蛋白酶酶解得到的多肽水解度最低,且对应的多肽分子量<1000 Da仅占9.03%,碱性蛋白酶酶解后得到的多肽水解度最高,<1000Da的分子量高达14.06%。各酶解多肽的抗氧化活性的结果显示木瓜蛋白酶酶解多肽对ABST自由基的清除能力最高,在浓度为1000μg/mL时,其清除率为95.76%,与阳性对照Vc在10μg/mL的清除能力相当。各组份抑制脂肪酶活力为依据,通过铜皂法测定提取蛋白及各酶解多肽对胰脂肪酶（PL）活性抑制能力,各组对PL活性抑制能力顺序为:碱性蛋白酶酶解多肽>胃蛋白酶酶解多肽>胰蛋白酶酶解多肽>木瓜蛋白酶酶解多肽>提取蛋白。其次,在对3T3-L1前脂肪细胞脂分化模型和LO2肝细胞脂变性模型研究中,测定各组分对甘油三酯和脂质的清除能力,结果发现在同一浓度下胰蛋白酶酶解多肽和碱性蛋白酶酶解多肽在对3T3-L1成脂细胞甘油三脂（TG）的清除率分别为26.47%和24.29%,而木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶在对LO2的细胞脂质清除能力较高。综合考量各酶解多肽活性,选择碱性蛋白酶为研究对象,进行超滤处理后发现分子量<5k Da（Ae）具有较强的脂肪酶活性抑制能力,其抑制率高达75.73%。Ae组分经过葡聚糖凝胶柱Sephadex G-25分离后得到四个组分（AI、AII、AIII和AIV）,用铜皂法对比分离的各组分对PL的抑制活性,选择活成成分较好的A-II经LC-MS/MS质谱分析后通过MASCOT对比分析搜库解谱,得到6条多肽分别为SISISVAGGGR、LLVVYPWTQR、SDDPHTFGQGTK、SRQLTLYPGAER、KNGAPAEK和KQTALVELVK。通过Peptide Ranker（http://bioware.ucd.ie）和Pep-site（http://pepsite2.russelllab.org/）筛选出LLVVYPWTQR（PP1）（MW 1274.53 Da）进行研究。结果显示PP1（200μg/mL）对PL的活性抑制率47.95%,分子对接的结果,分析其与PL活性位点之间的氢键、静电和疏水相互作用。构象揭示了PP1与PL的催化位点（Ser153,Asp177 and His 264）主要以氢键为主。然而其在浓度为600μg/mL时,对前脂肪细胞3T3-L1细胞内甘油三酯的清除率高达为27.9%,通过激活能量代谢通路AMPK,抑制SREBP-1c（固醇调节元件结合蛋白-1 C）信号蛋白及与脂肪细胞分化相关的C/EBP-α蛋白表达,实现其调节脂质代谢能力。在进一步深入的动物层面上的研究表明,相对于肥胖模型组,Ae能将小鼠体重降低了22.98%略低于阳性对照奥利司他（33.17%）,同时能够有效的减轻脂肪肝的症状,减少脂质的聚集,催化TG和TC分解,降低血液中血脂水平;可以通过抑制相关的C/EBP-α蛋白表达阻止脂质的合成,此外结果发现Ae能够激活NF-κB通路缓解肝肪脏引起的炎症,改善小鼠的炎症状态;肠道菌群层面上,Ae显着增加厚壁菌与拟杆菌比例至2.04、丰富肠道菌群属,Ae调节COG类主要参与代谢,包括氨基酸的生物合成、氨基酰基传递的生物合成以及次生代谢产物的生物合成、转运和分解代谢。KEGG信号通路分析也证实Ae与脂质代谢、碳代谢密切相关。这些发现可能为了解Ae在NAFLD发展和进展中的作用提供制度上的启示。模拟人体消化,将蛋白核小球藻蛋白经胃蛋白酶及胰蛋白酶在人体温度为37℃下酶解得到后,超滤<5k Da以下的分子为TPe。TPe组分经过葡聚糖凝胶柱Sephadex G-25分离后得到四个组分（TP-I、TP-II、TP-III和TP-IV）,用铜皂法对比分离的各组分对PL的抑制活性,选择活成成分较好的TP-IV经LC-MS/MS质谱分析后通过MASCOT对比分析搜库解谱,得到4条多肽分别为VVPEGVR、GSGFCGSSR、NPDGEPR和RDAEEWFHAK。通过Peptide Ranker（http://bioware.ucd.ie）和Pep-site（http://pepsite2.russelllab.org/）筛选出RDAEEWFHAK（TP1）进行研究。结果显示TP1（200μg/mL）对PL的活性抑制率40.2%,然而其在浓度为600μg/mL时,对前脂肪细胞3T3-L1细胞内甘油三酯的清除率高达为23.59%,分子对接的结果,TP1与PL的对接分数仅为136.7且仅有3个氢键与PL活性位点相连接。在对TPe体内活性研究中发现,TPe减缓高脂饲料喂养小鼠体重增长,减少肝脏脂质的堆积,催化TG和TC分解,降低血液中血脂水平;同时可以通过激活SIRTI/FOXP3神经信号通路实现。
李红红[9]（2019）在《CGF复合湿性CAL技术修复颜面部凹陷畸形中的临床应用研究》文中研究表明研究背景和目的自体脂肪移植操作相对简单,移植组织安全且来源丰富,在整形修复重建方面应用越来越广泛,提高移植成活率和降低远期吸收率是提高该项诊疗技术疗效的重点。相关组织工程基础研究发现,诸多细胞、生长因子辅助脂肪移植,可明显提高脂肪的成活率,为临床应用提供了理论基础。但在制备过程中,因需添加外源性物质而增加了相关风险,限制了该项技术的临床应用。从生物安全性考虑,研究第一部分选择第三代血小板浓缩物浓缩生长因子CGF为研究对象,同富血小板纤维蛋白PRF对照研究,并复合应用于湿性细胞辅助脂肪移植技术（CAL技术）,探讨联合脂肪组织移植后,对移植脂肪成活的影响,为其临床应用提供实验支持。第二部分通过CGF复合湿性CAL技术对颜面部凹陷畸形患者进行充填治疗,评估其临床效果和安全性,并与单纯脂肪移植组作比较。研究方法1.第一部分,利用新西兰大白兔自体静脉采血制备CGF,PRF,在构建动物模型上施行复合细胞辅助脂肪移植（CAL技术）,并将其对移植脂肪成活的作用进行检验。选择健康新西兰雄性大白兔30只,每两只为一对,共60只耳朵,随机分成4组:CGF目的组、PRF对照组、CAG对照组、空白对照组;所有动物麻醉、消毒铺巾后,自兔背部肩胛区切取脂肪组织,制备移植脂肪、同时抽取静脉血液制备CGF,PRF;将制备移植物与脂肪组织按不同分组设计混合后,植入兔耳背部移植受区直径为3cm的圆形皮下腔隙内;术后大体观察移植脂肪成活情况,脂肪体积测量计算成活率/吸收率;术后2周、4周、12周作为观察点,分别处死5对共10只兔子,对标本HE染色并于显微镜下组织学观察;术后4周获得标本分别行油红O染色及组织学观察,行VEGF免疫组化染色检测表达情况,同时用CD31免疫组化染色进行标本血管密度的计算,统计学分析结果。2.第二部分,分析43例接受颜面部脂肪充填的门诊患者资料,其中22例患者接受单纯脂肪移植,21例患者接受加入自体CGF复合湿性CAL技术方式移植。术后彩超检查效果观察,统计两组患者的手术恢复情况、脂肪吸收率、术中及术后并发症发生情况等资料,并接受满意度调查。结果1.实验动物模型建立,所有实验动物全部存活。脂肪移植后2周、4周、12周留取标本。组织学观察,术后第2周,空白对照组脂肪细胞周围被纤维结缔组织包绕、伴有少量炎性细胞浸润,脂肪细胞周围可见散在少量微血管。CGF目的组、PRF对照组脂肪组织周围纤维结缔组织少,CAG对照组居中,可见新生血管形成,CGF目的组、PRF对照组血管化结构更加清晰;术后第4周,各组脂肪细胞周围纤维结缔组织较上周减少,脂肪细胞之间可见大量成熟的血管样结构生成,改建进一步完善,PRF对照组脂肪组织中可见脂肪空泡及纤维结缔组织较空白对照组少,CAG对照组居中,CGF目的组则观察到更多的正常脂肪细胞形态,脂肪空泡更少,脂肪组织更均匀;术后第12周,各组脂肪组织形态均匀,可见较多的新生血管生成,毛细血管位于正常脂肪组织中的脂肪细胞旁,结缔组织方面未见明显差异。2.术后第4周标本油红O染色显示各组移植脂肪组织均有红染,空白对照组和CAG对照组脂肪组织层的厚度较薄,脂肪细胞染色局部不均匀、脂滴大小不等;PRF对照组居中,脂滴分布较前两组均匀;CGF目的组脂肪组织层厚更明显,脂肪细胞染色更均匀、大小均一,细胞分布也更均匀,移植脂肪体积保存CGF目的组最高。术后第4周VEGF免疫组织化学染色显示,各组均可见棕黄色颗粒沉积,CGF目的组、PRF对照组染色深,数量多;CAG对照组、空白对照组阳性颗粒较少。3.术后第4周、8周、12周脂肪存活率目的组和对照组之间差异有显着性。CGF目的组（85.40±2.58）%,（63.75±5.76）%,（63.62±5.75）%;PRF对照组（83.27±2.85）%,（60.53±2.69）%,（54.91±3.01）%;CAG对照组（66.45±3.98）%,（51.45±3.26）%,（40.94±5.02）%;空白对照组（54.23±2.63）%,（41.60±2.42）%,（27.07±2.32）%。相同时期比较结果显示,CGF目的组和PRF对照组脂肪存活情况要优于其他两组,同时CGF目的组远期稳定性要优于PRF对照组,空白对照组脂肪存活率最低。CGF目的组较对照组脂肪组织改建速度快、新生血管早、再生脂肪成活高、自吸收少,远期稳定性高。4.血管断面密度计数,由高到低排列为:CGF目的组（65.61±1.88）个/高倍视野,PRF对照组（55.78±6.21）个/高倍视野,CAG对照组（42.89±2.51）个/高倍视野,空白对照组（25.81±2.87）个/高倍视野。CGF目的组同PRF对照组、CAG对照组、空白对照组间差异有显着性,CGF可以促进移植脂肪毛细血管新生,其促血管化作用优于对照组。5.临床试验两组患者脂肪移植充填术后,颜面部外观均有明显改善,未见感染、血肿、破溃、充填部位皮肤坏死、脂肪硬结、肉芽肿等严重的并发症。术后回访,部分患者早期伴有术区肿胀不适,多于术后2-3天自行缓解,术后一周回访肿胀已基本消退,大体观察移植术区柔软无明显硬结,轮廓圆润饱满。B超回声影像观察,CGF组较单纯脂肪颗粒移植组早期液化发生更少、移植脂肪铺展均匀。术后第1,3,6个月B超检查两组移植脂肪成活率差异有统计学意义,复合CGF组分别为（85.07±3.47）%,（79.84±3.34）%,（78.84±5.06）%,术后3mon与术后6mon比较差异无统计学意义（p=0.308）。单纯自体脂肪颗粒移植组分别为（67.53±5.33）%,（56.77±4.03）%,（51.04±4.75）%,术后3mon与术后6mon植入物成活情况比较t=5.82（p<0.001）。自体脂肪颗粒组术后一个月发现液化灶的机率为40.91%,6个月需再次或多次脂肪填充比例为54.55%;自体脂肪颗粒复合CGF组发现液化灶的机率为9.52%,再次或多次脂肪填充比例为19.05%。结果显示CGF复合脂肪颗粒注射移植后成活率高,远期移植物稳定性良好,二次手术的机率降低,患者对治疗的满意度高。结论1.通过对兔耳脂肪移植实验结果显示,脂肪组织在移植后会经过持续脂肪改建和血管新生的过程。由于受到多重因素以及CGF,PRF的作用的影响,不同组分中移植脂肪组织的改建、重建速度,以及新生血管速度均不相同。分析实验结果,CGF目的组较对照组脂肪组织改建速度快,新生血管早,脂肪细胞周围炎性细胞浸润轻。CGF混合脂肪移植,具有提高移植脂肪成活,减少脂肪吸收的作用,远期效果观察移植物稳定性优于PRF混合脂肪移植,可望成为辅助脂肪组织移植充填的有效手段。2.临床应用CGF复合湿性CAL技术对颜面部凹陷畸形的治疗,并将治疗效果同单纯离心浓缩的脂肪颗粒移植对比,结果提示利用该项技术进行的脂肪充填移植,术后移植脂肪组织成活率更高,发生液化的几率减少,术后移植物稳定性更好,由于组织存活良好降低了吸收率,可以有效避免或减少再次充填。充填后局部皮肤饱满圆润、与周围过度自然,未见明显不良反应,患者对该项治疗的满意度高。
姜晓天[10]（2019）在《基于IRE1α/JNK通路探讨解毒通络调肝方干预脂肪组织胰岛素抵抗的机制研究》文中指出目的:通过评价解毒通络调肝方对肥胖2型糖尿病（T2DM）大鼠脂肪组织胰岛素抵抗（IR）的干预效果,观察其对脂肪细胞内质网应激（ERS）相关蛋白表达的影响,探讨解毒通络调肝方治疗IR的作用和机制。方法:体内实验通过高脂饲料诱导ZDF大鼠建立肥胖T2DM模型,ZL大鼠作为正常对照组以普通饲料维持饲喂,无药物干预。西药组以盐酸二甲双胍（0.5g·kg-1·d-1）灌胃作为阳性药物对照。中药组应用低、中、高剂量（1g·kg-1·d-1,3g·kg-1·d-1,5g·kg-1·d-1）解毒通络调肝方进行药物灌胃。灌胃持续8周后观察解毒通络调肝方对成模大鼠糖脂代谢的影响,评价其糖耐量和胰岛素敏感性,检测脂肪组织中IRE1、P-IRE1、JNK,P-JNK的蛋白表达和IRS1的mRNA表达。体外实验通过衣霉素诱导成熟的3T3-L1脂肪细胞建立ERS模型,对照组未经衣霉素诱导,无药物干预。西药组以盐酸二甲双胍（1mmol/L,即0.166μg/ml）作为阳性药物对照,中药组应用低、中、高剂量解毒通络调肝方（25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml）进行药物干预。测定解毒通络调肝方对脂肪细胞葡萄糖摄取量的影响,评价其胰岛素敏感性,检测脂肪细胞IRE1、JNK和NF-κB的蛋白表达,以及脂肪细胞因子和炎症因子ADPN、LP、IL-6和TNF-α的蛋白表达变化。结果:通过12周高脂饲喂,模型组脂代谢相关指标如体质量、总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白等显着上升（P<0.05,P<0.01）,糖代谢相关指标如空腹血糖、空腹胰岛素、糖化血红蛋白、IR指数等相关指标显着上升（P<0.01）,口服糖耐量试验中出现血糖峰值延迟,IR显着。经药物干预,中药组和西药组糖脂代谢异常均得到不同程度改善,中药各剂量组体质量均下降,其中高剂量组下降显着（P<0.05）,IR指数显着下降（P<0.05,P<0.01）,血糖峰值延迟恢复,口服糖耐量试验提示中药各剂量组对ZDF大鼠糖耐量起到恢复作用（P<0.01）。中药高剂量组对于总胆固醇、高密度脂蛋白和空腹血糖的调节效果优于西药组（P<0.05）。以Western blot法检测ERS相关蛋白结果显示,与模型组相比,中药组对脂肪组织中IRE1α和JNK产生抑制,并且降低了其磷酸化的比例（P<0.05,P<0.01）。RT-PCR结果示,与模型组相比,中药中、高剂量组IRS1的mRNA表达有显着上升（P<0.01）。对JNK、p-JNK蛋白表达的抑制和IRS1的mRNA上调,中药高剂量组较西药组更加显着（P<0.01）。提示解毒通络调肝方能够通过降低IRE1α和JNK磷酸化水平,减轻脂肪组织ERS,改善模型大鼠糖、脂代谢异常,减轻体质量,恢复受损糖耐量,降低胰岛素敏感指数,提高胰岛素敏感性,控制IR进展。通过衣霉素对成熟3T3-L1脂肪细胞进行诱导后,ERS相关蛋白IRE1、JNK的表达出现显着上调（P<0.05,P<0.01）,葡萄糖摄取量显降低且胰岛素敏感性降低（P<0.05,P<0.01）,NF-κB蛋白表达明显上升（P<0.01）,同时TNF-α、IL-6、LP表达亦显着升高（P<0.01）,而ADPN显着下降（P<0.01）。经过解毒通络调肝方的药物干预,其炎症和ERS状态均得到不同程度改善,脂肪细胞因子的异常分泌得到控制,胰岛素敏感性上升,IR水平显着降低。中药高剂量组对胰岛素敏感性的改善和对IL-6表达的抑制较西药组更优（P<0.05,P<0.01）,中药高剂量组对JNK和TNF-α的抑制、对对IRS1的mRNA表达上调与西药组无显着差异（P>0.05）。提示解毒通络调肝方对于脂肪细胞IR的作用机制,可能与抑制IRE1α/JNK表达,以减轻炎症状态,缓解ERS,改善胰岛素信号转导。结论:解毒通络调肝方对肥胖T2DM大鼠的糖脂代谢异常有较好的治疗作用,能够减轻体重,并起到胰岛素增敏剂的作用;毒损肝络是T2DM重要病机之一,以解毒通络调肝法治疗IR具有其可行性和独特优势;解毒通络调肝方改善IR的作用靶点可能是脂肪组织ERS,其机制可能是通过抑制脂肪细胞IRE1α/JNK信号通路,调节脂肪细胞因子、炎症因子异常分泌,缓解ERS,以改善胰岛素信号转导。
二、3种方法对脂肪细胞损伤程度的人体实验研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、3种方法对脂肪细胞损伤程度的人体实验研究（论文提纲范文）
（1）IL-17及炎症相关因子在脂肪组织中的表达（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略表 |
| 引言 |
| 第1章 实验研究 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 药物与仪器 |
| 1.1.3 实验动物及分组处理 |
| 1.1.4 Western Blotting检测皮下脂肪组织中IL-17和IL-17RA蛋白表达 |
| 1.1.5 ELISA法检测脂肪组织匀浆中IL-17及IL-17RA蛋白 |
| 1.1.6 HE染色观察皮下脂肪组织形态学改变 |
| 1.1.7 免疫荧光检测皮下脂肪组织的巨噬细胞聚集情况 |
| 1.1.8 实时荧光定量PCR测定皮下脂肪组织的IL-17、IL-17RA、MCP-1和TNF-αm RNA水平 |
| 1.1.9 免疫组化法检测皮下脂肪组织IL-17、TNF-α和IL-1β蛋白的表达与定位 |
| 1.1.10 统计学分析 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 各组小鼠体重及脂肪组织重量 |
| 1.2.2 肥胖小鼠脂肪组织中IL-17及IL-17RA蛋白表达增加 |
| 1.2.3 抗IL-17抗体对肥胖小鼠皮下脂肪组织的细胞形态及炎性细胞浸润的影响 |
| 1.2.4 抗IL-17抗体对小鼠脂肪组织中巨噬细胞聚集的影响 |
| 1.2.5 各组小鼠皮下脂肪组织中炎症因子基因表达水平 |
| 1.2.6 抗IL-17抗体对肥胖小鼠皮下脂肪组织中炎性因子蛋白表达的影响 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 第2章 综述 肥胖相关的慢性炎症机制研究进展 |
| 2.1 肥胖与脂肪组织 |
| 2.2 肥胖中的炎症反应 |
| 2.3 肥胖慢性炎症状态 |
| 2.4 慢性炎症疾病 |
| 2.5 慢性炎症的发生机制 |
| 2.6 肥胖有关炎症以及胰岛素抵抗 |
| 2.7 肥胖造成的慢性炎症效应 |
| 2.8 慢性炎症对肥胖及有关慢性疾病临床治疗的表示 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间研究成果 |
（2）热挤压3D打印构建大米淀粉-儿茶素复合物的消化性能及抗肥胖机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 肥胖概述 |
| 1.1.1 肥胖产生的影响因素及危害 |
| 1.1.2 肥胖与能量代谢 |
| 1.1.3 肥胖与胰岛素抵抗 |
| 1.1.4 肥胖与血脂代谢 |
| 1.1.5 肥胖与肠道微生物 |
| 1.1.6 肥胖对其他生理功能的影响 |
| 1.2 肥胖的预防及营养干预 |
| 1.2.1 肥胖的治疗与预防 |
| 1.2.2 碳水化合物及其营养功能 |
| 1.2.3 淀粉的消化性能与营养功能 |
| 1.3 淀粉消化性能调控 |
| 1.3.1 淀粉酶与淀粉消化性能 |
| 1.3.2 淀粉多尺度结构与消化性能 |
| 1.3.3 淀粉多尺度结构修饰对其消化性能的调控 |
| 1.3.4 热挤压3D打印技术调控淀粉的多尺度结构 |
| 1.4 本论文的研究意义、研究目标和研究内容 |
| 1.4.1 研究意义 |
| 1.4.2 研究目标 |
| 1.4.3 研究内容 |
| 第二章 热挤压3D打印协同儿茶素复合调控大米淀粉消化性能的机理研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料与仪器 |
| 2.2.1 主要实验材料 |
| 2.2.2 主要实验仪器及设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 热挤压3D打印大米淀粉-儿茶素复合物的制备 |
| 2.3.2 热挤压3D打印大米淀粉-儿茶素复合物消化性能的测定 |
| 2.3.3 热挤压3D打印大米淀粉-儿茶素复合物螺旋结构的测定 |
| 2.3.4 热挤压3D打印大米淀粉-儿茶素复合物表面短程有序结构的测定 |
| 2.3.5 热挤压3D打印大米淀粉-儿茶素复合物结晶结构的测定 |
| 2.3.6 热挤压3D打印大米淀粉-儿茶素复合物表面分形及糊体系亚微观结构的测定 |
| 2.3.7 分子对接技术 |
| 2.3.8 分子动力学模拟 |
| 2.3.9 数据分析 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 热挤压3D打印大米淀粉-儿茶素复合物的消化性能 |
| 2.4.2 热挤压3D打印大米淀粉-儿茶素复合物的螺旋结构 |
| 2.4.3 热挤压3D打印大米淀粉-儿茶素复合物的表面分子短程有序化结构 |
| 2.4.4 热挤压3D打印大米淀粉-儿茶素复合物的结晶结构 |
| 2.4.5 热挤压3D打印大米淀粉-儿茶素复合物的分形结构 |
| 2.4.6 热挤压3D打印大米淀粉-儿茶素复合物糊体系的亚微观结构 |
| 2.4.7 大米淀粉-儿茶素复合物消化性能与多尺度结构的相关性分析 |
| 2.4.8 大米淀粉-儿茶素复合物与胰α-淀粉酶分子间相互作用的分子动力学模拟 |
| 2.4.9 热挤压3D打印协同儿茶素复合调控大米淀粉消化性能的分子机制 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 大米淀粉-儿茶素复合物对高脂膳食肥胖大鼠脂代谢及肝脏转录组的影响 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料与仪器设备 |
| 3.2.1 主要实验试剂 |
| 3.2.2 主要实验仪器与设备 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 动物实验方案及饮食设计 |
| 3.3.2 样品采集及处理 |
| 3.3.3 组织切片观察 |
| 3.3.4 血清生化指标测定 |
| 3.3.5 血清脂质组学测定 |
| 3.3.6 肝脏组织中基因的表达量测定 |
| 3.3.7 肝脏转录组测序 |
| 3.3.8 数据分析 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 大米淀粉-儿茶素复合物对肥胖受试鼠体重的影响 |
| 3.4.2 大米淀粉-儿茶素复合物对受试鼠血糖的影响 |
| 3.4.3 大米淀粉-儿茶素复合物对受试鼠血脂的影响 |
| 3.4.4 大米淀粉-儿茶素复合物对受试鼠肝功能指标的影响 |
| 3.4.5 大米淀粉-儿茶素复合物对受试鼠氧化应激指标的影响 |
| 3.4.6 大米淀粉-儿茶素复合物对受试鼠组织切片的影响 |
| 3.4.7 大米淀粉-儿茶素复合物对受试鼠血清脂质代谢的影响 |
| 3.4.8 大米淀粉-儿茶素复合物对肝脏组织基因相对表达量的影响 |
| 3.4.9 大米淀粉-儿茶素复合物对受试鼠肝脏转录组的影响 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 大米淀粉-儿茶素复合物对高脂膳食肥胖大鼠肠道微生态的影响 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料与仪器设备 |
| 4.2.1 主要实验试剂 |
| 4.2.2 主要实验仪器与设备 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 组织切片观察 |
| 4.3.2 肠道中短链脂肪酸的测定 |
| 4.3.3 胃肠激素水平测定 |
| 4.3.4 肠道中总胆汁酸水平测定 |
| 4.3.5 粪便脂质组学测定 |
| 4.3.6 肠道微生物检测 |
| 4.3.7 数据分析 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 大米淀粉-儿茶素复合物干预对受试鼠结肠组织的影响 |
| 4.4.2 大米淀粉-儿茶素复合物干预对受试鼠肠道短链脂肪酸含量的影响 |
| 4.4.3 大米淀粉-儿茶素复合物干预对受试鼠胃肠激素水平的影响 |
| 4.4.4 大米淀粉-儿茶素复合物干预对受试鼠肠道胆汁酸及肠道脂代谢影响 |
| 4.4.5 大米淀粉-儿茶素复合物干预对受试鼠肠道微生物的影响 |
| 4.4.6 大米淀粉-儿茶素复合物干预对受试鼠生理生化指标与肠道菌群相关性的分析 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 大米淀粉-儿茶素复合物对肥胖小鼠能量代谢及棕色脂肪调节作用的影响 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料与仪器设备 |
| 5.2.1 主要实验试剂 |
| 5.2.2 主要实验仪器与设备 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 动物实验方案及饲养 |
| 5.3.2 受试鼠活体脂肪和肌肉含量分析及代谢水平、能量支出监测 |
| 5.3.3 受试鼠低温造模、体温及体表温度测定 |
| 5.3.4 胰岛素耐量试验 |
| 5.3.5 取材及处理方法 |
| 5.3.6 血清中生化指标测定 |
| 5.3.7 脂肪组织形态学观察 |
| 5.3.8 脂肪组织基因表达量测定 |
| 5.3.9 免疫印迹试验 |
| 5.3.10 数据分析 |
| 5.4 结果与讨论 |
| 5.4.1 大米淀粉-儿茶素复合物干预对受试鼠体重及体脂比的影响 |
| 5.4.2 大米淀粉-儿茶素复合物干预对受试鼠胰岛素耐受性的影响 |
| 5.4.3 大米淀粉-儿茶素复合物干预对受试鼠血脂和血浆游离脂肪酸的影响 |
| 5.4.4 室温环境下大米淀粉-儿茶素复合物干预对受试鼠能量代谢的影响 |
| 5.4.5 大米淀粉-儿茶素复合物干预对受试鼠体温的影响 |
| 5.4.6 大米淀粉-儿茶素复合物干预对受试鼠脂肪组织形态学的影响 |
| 5.4.7 大米淀粉-儿茶素复合物干预对受试鼠i BAT和 ing WAT中产热相关基因及蛋白表达的影响 |
| 5.4.8 室温环境下大米淀粉-儿茶素复合物干预对受试鼠iBAT中脂代谢相关基因及蛋白表达的影响 |
| 5.5 本章小结 |
| 结论与展望 |
| 一、结论 |
| 二、创新点 |
| 三、展望 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 附件 |
（3）葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠保护作用的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 急性酒精肝损伤发病机制及治疗研究现状 |
| 参考文献 |
| 综述二 葛花、枳椇子化学成分和药理作用研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述三 酒精性肝损伤动物模型制备的研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠肝脏保护作用的研究 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 实验二 葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠乙醇浓度及乙醇脱氢酶活性的研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 实验三 葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠肝脏抗氧化作用的研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 实验四 葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠肝脏组织病理形态的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 实验五 葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠肝脏Keap1和Nrf2基因及蛋白表达的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 实验六葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠肝脏AQP9基因及蛋白表达的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 展望 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
（4）清热药治疗2型糖尿病用药规律及其对调节肠道菌群作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 古今医家应用清热法治疗糖尿病相关文献综述 |
| 1 古代医家应用清热法治疗消渴相关文献综述 |
| 2 现代医家应用清热法治疗糖尿病的文献综述 |
| 3 泰国传统医学治疗糖尿病的现状 |
| 4 小结与展望 |
| 参考文献 |
| 综述二 2型糖尿病与肠道菌群相关性及常用清热药作用机制研究进展 |
| 1 肠道菌群组成结构与功能 |
| 2 糖尿病与体内肠道菌群的变化 |
| 3 肠道菌群诱发糖尿病的机制 |
| 4 治疗糖尿病常用清热药作用机制研究进展 |
| 5 黄连治疗糖尿病的现代研究进展 |
| 6 泰国传统草药治疗糖尿病的作用机制研究进展 |
| 7 小结与展望 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 文献研究: 基于古今文献数据挖掘的清热药治疗糖尿病相关用药规律研究 |
| 研究一 基于数据挖掘的古代医籍应用清热药治疗消渴相关用药规律研究 |
| 1 研究资料 |
| 2 研究方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 研究二 基于数据挖掘的现代医家应用清热药治疗糖尿病相关用药规律研究 |
| 1 研究资料 |
| 2 研究方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 临床研究 赵进喜教授应用清热药治疗2型糖尿病用药规律研究 |
| 1 研究资料 |
| 2 研究方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 实验研究 基于肠道菌群的黄连治疗2型糖尿病降糖机制研究 |
| 对象与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 附录1 世界中医药学会联合会糖尿病专业委员会《糖尿病及其并发症本虚标实证候诊断标准》（泰语版） |
| 附录2 世界中医药学会联合会糖尿病专业委员会《糖尿病及其并发症本虚标实证候诊断标准》（汉语版） |
| 致谢 |
| 在读期间主要研究成果 |
（5）基于RhoA/ROCK通路探讨逐瘀壮骨汤干预激素性股骨头坏死的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 1.1 ONFH的中、西医理论学说 |
| 1.1.1 骨病的中医记载及辨证学说 |
| 1.1.1.1 骨病的中医记述 |
| 1.1.1.2 传统中医辨证学的骨病学说 |
| 1.2 ONFH的现代中医辨证及治疗 |
| 1.2.1 ONFH的中医辨证标准 |
| 1.2.2 ONFH的中医、中药疗法 |
| 1.3 西医对ONFH的认识 |
| 1.3.1 国内ONFH的流行病学研究 |
| 1.3.2 ONFH的发病原因 |
| 1.3.3 ONFH的症状、诊断方法及分期 |
| 1.3.4 ONFH的治疗方法与治疗原则 |
| 1.3.5 ONFH的治疗效果评价 |
| 1.3.6 ONFH的特殊事件 |
| 1.3.7 ONFH的围塌陷期诊断、治疗 |
| 1.3.8 ONFH发生塌陷的机制 |
| 1.4 中、西医治疗SONFH的优势与劣势 |
| 1.5 中、西医对GCs药性的认识 |
| 1.5.1 中医对GCs的药性认识 |
| 1.5.2 西医对GCs的认识 |
| 1.6 SONFH的具体病理机制 |
| 1.6.1 脂质代谢紊乱理论 |
| 1.6.2 自噬和细胞凋亡理论 |
| 1.6.3 BMSCs成骨分化能力降低理论 |
| 1.6.4 基因多态性与非编码RNA理论 |
| 1.6.5 血管凝血理论 |
| 1.7 中药血清代谢动力研究理论 |
| 1.7.1 中药血清药物化学的历史发展 |
| 1.7.2 中药代谢动力学理论基础和研究范畴 |
| 1.7.3 中药代谢动力学理论与中医证候及方剂的关系 |
| 1.7.4 药物血清代谢动力学理论与动物实验 |
| 1.8 BMSCs的研究进展 |
| 1.8.1 BMSCs的概论 |
| 1.8.2 BMSCs的鉴定 |
| 1.8.3 BMSCs的分化 |
| 1.8.4 BMSCs在骨科临床中的应用 |
| 1.8.5 中药对于BMSCs的生长和成骨分化特性的干预 |
| 1.9 控制BMSCs成骨分化的细胞内信号通路研究 |
| 1.9.1 BMSCs成骨分化的细胞通路概论 |
| 1.9.2 RhoA/ROCK通路及其在细胞代谢中的研究 |
| 1.9.3 RhoA/ROCK通路与SONFH关联的猜想 |
| 第二章 实验研究一 逐瘀壮骨汤对大鼠激素性股骨头坏死的干预作用 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 实验药材 |
| 2.2.3 实验仪器 |
| 2.2.4 实验试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 分组及造模 |
| 2.3.2 SONFH大鼠造模检测方法 |
| 2.3.3 大鼠股骨头空骨陷窝计数 |
| 2.3.4 给药治疗 |
| 2.3.5 取材方法 |
| 2.3.5.1 取血样本 |
| 2.3.5.2 取股骨头样本 |
| 2.3.6 血液标本的检测 |
| 2.3.7 大鼠股骨头HE染色及组织形态学观察 |
| 2.4 数据统计分析 |
| 2.5 结果 |
| 2.5.1 SONFH大鼠造模鉴定结果 |
| 2.5.2 血液生化指标检测 |
| 2.5.3 股骨头HE染色组织形态学观察 |
| 2.6 讨论 |
| 2.6.1 SONFH动物模型的构建 |
| 2.6.2 逐瘀壮骨汤的药物组成及药理作用 |
| 2.6.3 逐瘀壮骨汤对大鼠SONFH的干预效果 |
| 2.7 小结 |
| 第三章 实验研究二 逐瘀壮骨汤对激素诱导大鼠BMSCs增殖及分化的影响 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 实验药物 |
| 3.2.3 实验仪器 |
| 3.2.4 实验试剂 |
| 3.2.5 主要试剂配制 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 BMSCs的获取、培养及鉴定 |
| 3.3.2 激素造模及分组 |
| 3.3.3 各浓度含药血清干预细胞 |
| 3.3.4 BMSCs增殖活力检测 |
| 3.3.5 BMSCs成脂分化染色鉴定与TG定量检测 |
| 3.3.6 BMSCs的成骨诱导、鉴定与OCN定量检测 |
| 3.3.7 Real Time PCR检测RhoA/ROCK通路成骨相关基因表达 |
| 3.3.8 Western Blot检测 |
| 3.3.9 统计学方法 |
| 3.4 结果 |
| 3.4.1 BMSCs形态的镜下观察 |
| 3.4.2 BMSCs增殖活力检测实验结果 |
| 3.4.3 BMSCs的成脂分化染色与TG定量检测 |
| 3.4.4 BMSCs的成骨诱导分化鉴定与OCN定量检测 |
| 3.4.5 RT-PCR检测相关因子的mRNA表达 |
| 3.4.6 Western-Blot检测各目的基因蛋白表达 |
| 3.5 讨论 |
| 3.5.1 逐瘀壮骨汤调控激素干预BMSCs增殖及分化特性的分析 |
| 3.5.2 逐瘀壮骨汤调控激素诱导BMSCs的RhoA/ROCK通路作用机制 |
| 3.6 小结 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 统计学审核证明 |
（6）脂肪细胞结构和活性对移植后脂肪存活的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 构建脂肪细胞结构和活性差异，但其他变量相同的脂肪颗粒 |
| 引言 |
| 一：主要实验材料和仪器 |
| 二：实验方法 |
| 三：结果 |
| 四：讨论 |
| 五：结论 |
| 第二部分 结构和功能差异的脂肪颗粒裸鼠体内移植实验研究 |
| 引言 |
| 一：主要实验材料和仪器 |
| 二：实验方法 |
| 三：结果 |
| 四：讨论 |
| 五：结论 |
| 第三部分 保护脂肪细胞的结构与活性的手术方法，在自体脂肪移植乳房整形手术中的效果观察 |
| 引言 |
| 一：一般资料 |
| 二：手术方法 |
| 三：结果 |
| 四：典型案例 |
| 五：讨论 |
| 六：结论 |
| 全文小结 |
| 参考文献 |
| 综述 脂肪移植物存活机制研究现状 |
| 参考文献 |
| 英文缩略词表 |
| 致谢 |
（7）骨痹通消方调节OPG/RANK/RANKL系统治疗激素性股骨头坏死小鼠的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词中英文对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 基础理论研究 |
| 1.传统医学对股骨头坏死的认识 |
| 1.1 股骨头坏死的中医病因病机 |
| 1.2 股骨头坏死的中医辨证治疗 |
| 2.现代医学对SANFH的认识 |
| 2.1 SANFH的发病机制 |
| 2.2 SANFH的病理改变 |
| 3.SANFH的治疗 |
| 3.1 非手术治疗 |
| 3.2 手术治疗 |
| 第二部分 早期激素性股骨头坏死小鼠模型的构建 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 动物 |
| 1.2 药物 |
| 1.3 模型制备 |
| 1.4 检测原理及步骤 |
| 2.结果 |
| 2.1 一般情况 |
| 2.2 影像学表现 |
| 2.3 骨标志物检测结果 |
| 2.4 实验结果 |
| 3.讨论 |
| 3.1 BALP与 PINP |
| 3.2 SANFH实验模型的制备方法 |
| 3.3 LPS联合GC诱导股骨头坏死的基本理论 |
| 第三部分 骨痹通消方治疗早期SANFH小鼠的实验研究 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 动物 |
| 1.2 方法 |
| 2.主要实验耗材与仪器 |
| 2.1 RT-qPCR实验器材及试剂 |
| 2.2 Western Blot实验耗材与仪器 |
| 3.实验方法 |
| 3.1 RT-qPCR |
| 3.1.1 Total RNA 抽提 |
| 3.1.2 Total RNA 质检 |
| 3.1.3 反转录(First Strand c DNA Synthesis) |
| 3.1.4 RT-q PCR 检测 |
| 3.1.5 计算方法 |
| 3.2 Western Blot |
| 4.研究结果 |
| 4.1 蛋白印记图 |
| 4.2 OPG 检测结果 |
| 4.3 RANKL 检测结果 |
| 4.4 RANK 检测结果 |
| 4.5 PLCγ2 检测结果 |
| 4.6 CTSK 检测结果 |
| 4.7 TRAP 检测结果 |
| 5.实验结果 |
| 6.讨论 |
| 6.1 骨痹通消方治疗激素性股骨头坏死的理论基础 |
| 6.2 OPG/RANK/RANKL系统 |
| 结论 |
| 1.总结 |
| 2.创新点 |
| 参考文献 |
| 综述 激素性股骨头坏死发病机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（8）蛋白核小球藻多肽调节脂质的代谢及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 小球藻概述 |
| 1.1.1 小球藻概况 |
| 1.1.2 小球藻的活性成分 |
| 1.1.3 小球藻的生理活性 |
| 1.1.4 小球藻的破碎方法 |
| 1.2 蛋白核小球藻的研究现状 |
| 1.2.1 蛋白核小球藻的活性成分 |
| 1.2.2 蛋白核小球藻活性蛋白的研究现状 |
| 1.3 脂质代谢疾病的概述 |
| 1.3.1 脂质代谢疾病研究背景 |
| 1.3.2 脂质积累产生的非酒精性脂肪肝病理与成因 |
| 1.3.3 能量代谢的相关通路 |
| 1.4 蛋白及多肽的抗脂肪肝作用 |
| 1.4.1 国内外研究进展 |
| 1.5 课题研究内容及意义 |
| 1.5.1 本课题研究的内容 |
| 1.5.2 研究意义 |
| 第二章 蛋白核小球藻蛋白酶解多肽制备和抗氧化活性研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 材料与试剂 |
| 2.2.2 主要仪器设备 |
| 2.3 实验过程与方法 |
| 2.3.1 凯氏定氮法测定蛋白核小球藻粉中的粗蛋白含量 |
| 2.3.2 蛋白核小球藻粉中的粗蛋白提取 |
| 2.3.3 抗氧化活性评价 |
| 2.3.4 蛋白核小球藻蛋白的酶解及水解物的分子量分布 |
| 2.3.5 数理统计 |
| 2.4 结果 |
| 2.4.1 不同细胞分裂方法的比较 |
| 2.4.2 蛋白核小球藻粗蛋白提取率及含量的测定 |
| 2.4.3 蛋白提取方法优化 |
| 2.4.4 粗蛋白的抗氧化活性 |
| 2.4.5 酶解水解度及分子量分布 |
| 2.4.6 粗多肽的抗氧化活性 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 蛋白核小球藻多肽的分离纯化及其活性成分的降脂机制 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 材料与试剂 |
| 3.2.2 主要的仪器设备 |
| 3.3 实验过程与方法 |
| 3.3.1 主要溶液的配制 |
| 3.3.2 各组分酶解多肽的化学法抗肥胖活性评价 |
| 3.3.3 各组分酶解多肽的体外细胞抗肥胖活性评价 |
| 3.3.4 各组分酶解多肽体外肝细胞抗脂肪肝活性评价 |
| 3.3.5 凝胶色谱层析 |
| 3.3.6 各组分对3T3-L1 增殖的影响 |
| 3.3.7 LC-MS/MS定义多肽 |
| 3.3.8 多肽的合成 |
| 3.3.9 合成肽的活性评价 |
| 3.3.10 统计分析 |
| 3.4 结果 |
| 3.4.1 铜皂法抗肥胖活性的测定 |
| 3.4.2 蛋白核小球藻多肽对3T3-L1 细胞的增殖影响 |
| 3.4.3 蛋白核小球藻多肽对3T3-L1 细胞的甘油三脂影响 |
| 3.4.4 蛋白核小球藻多肽对LO2 细胞的增殖影响 |
| 3.4.5 蛋白核小球藻多肽对油酸LO2 细胞内TG的积累影响 |
| 3.4.6 碱性蛋白酶酶解蛋白核小球藻多肽经超滤后的脂肪酶抑制活性 |
| 3.4.7 碱性蛋白酶酶解多肽的凝胶色谱柱层析结果及活性评价 |
| 3.4.8 碱性蛋白酶水解肽A-II活性组分分离纯化 |
| 3.4.9 碱性蛋白酶中多肽PP1 中合成肽的HPLC和活性预测 |
| 3.4.10 碱性蛋白酶中多肽中合成肽的对细胞内蛋白的影响 |
| 3.4.11 分子对接研究 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 蛋白核小球藻多肽Ae对肥胖小鼠体内脂质积累的治疗作用 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 实验试剂与材料 |
| 4.2.2 实验动物 |
| 4.2.3 高脂饲料 |
| 4.2.4 仪器与试剂 |
| 4.3 实验内容与方法 |
| 4.3.1 分组和造模 |
| 4.3.2 分血脂分析 |
| 4.3.3 氧化酶水平测定 |
| 4.3.4 组织学分析 |
| 4.3.5 蛋白印迹分析 |
| 4.3.6 16SrRNA测序技术分析肠道菌群 |
| 4.3.7 数理统计 |
| 4.4 结果 |
| 4.4.1 蛋白核小球藻多肽Ae对脂肪肝小鼠的体重影响 |
| 4.4.2 蛋白核小球藻多肽Ae对脂肪肝小鼠附睾脂肪的影响 |
| 4.4.3 蛋白核小球藻多肽Ae对肝脏及附睾脂肪组织病理改变 |
| 4.4.4 蛋白核小球藻多肽Ae对肠道病变的影响 |
| 4.4.5 蛋白核小球藻多肽Ae对脂肪肝小鼠血脂的影响 |
| 4.4.6 蛋白核小球藻多肽Ae对脂肪肝氧化酶的影响 |
| 4.4.7 蛋白核小球藻多肽Ae对肝脏蛋白表达水平的影响 |
| 4.4.8 蛋白核小球藻多肽Ae对肠道菌群组成的变化 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 蛋白核小球藻双酶解分离纯化及活性多肽鉴定 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 实验材料 |
| 5.2.1 材料与试剂 |
| 5.2.2 主要的仪器设备 |
| 5.3 实验过程与方法 |
| 5.3.1 模拟肠胃酶解蛋白核小球藻蛋白 |
| 5.3.2 活性多肽组分凝胶质谱分离并LC-MS/MS鉴定多肽 |
| 5.3.3 多肽的合成 |
| 5.3.4 合成肽的活性评价 |
| 5.3.5 数理统计 |
| 5.4 结果 |
| 5.4.1 模拟人体酶解蛋白核小球藻多肽双酶酶解 |
| 5.4.2 双酶酶解多肽的凝胶色谱柱层析结果及活性评价 |
| 5.4.3 双酶蛋白酶水解肽TP-IV |
| 5.4.4 TP1 多肽中合成肽的HPLC和活性检测 |
| 5.5 本章小结 |
| 第六章 蛋白核小球藻双酶解多肽TPe对脂质代谢的作用 |
| 6.1 前言 |
| 6.2 实验材料 |
| 6.2.1 实验试剂与材料 |
| 6.2.2 实验动物 |
| 6.2.3 高脂饲料 |
| 6.2.4 仪器与试剂 |
| 6.3 实验内容与方法 |
| 6.3.1 动物分组 |
| 6.3.2 分血脂分析 |
| 6.3.3 酶水平测定 |
| 6.3.4 组织学分析 |
| 6.3.5 蛋白印迹分析 |
| 6.3.6 数理统计 |
| 6.4 结果 |
| 6.4.1 蛋白核小球藻多肽TPe对脂肪肝小鼠的体重及食量的影响 |
| 6.4.2 蛋白核小球藻多肽TPe对脂肪肝小鼠皮下及附睾脂肪的影响 |
| 6.4.3 蛋白核小球藻多肽TPe对肝脏组织病理改变 |
| 6.4.4 蛋白核小球藻多肽TPe对肠道病变的影响 |
| 6.4.5 蛋白核小球藻多肽TPe对脂肪肝小鼠血脂的影响 |
| 6.4.6 蛋白核小球藻多肽TPe对脂肪肝氧化酶的影响 |
| 6.4.7 蛋白核小球藻多肽TPe对肝脏蛋白表达水平的影响 |
| 6.6 本章小结 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 附录 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 附件 |
（9）CGF复合湿性CAL技术修复颜面部凹陷畸形中的临床应用研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 引言 |
| 第一部分 、兔CGF的制备以及复合自体脂肪颗粒体内移植的基础研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 主要试剂材料 |
| 1.2 主要仪器设备 |
| 1.3 实验动物及分组 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 术前准备 |
| 2.2 实验动物脂肪切取和移植受区制备 |
| 2.3 实验动物移植物的制备 |
| 2.4 实验分组及脂肪复合组织移植方法 |
| 2.5 实验动物术后处理 |
| 2.6 观察指标及方法 |
| 2.7 统计学分析 |
| 2.8 实验流程图 |
| 3 结果 |
| 3.1 外科观察 |
| 3.2 HE染色组织学观察 |
| 3.3 改良油红O染色组织学观察 |
| 3.4 术后移植脂肪体积测量及各组脂肪移植成活率/吸收率 |
| 3.5 VEGF免疫组化染色 |
| 3.6 微血管密度(MVD)检测 |
| 4 讨论 |
| 4.1 研究背景 |
| 4.2 理论依据 |
| 4.3 实验设计及结果分析 |
| 5 结论 |
| 第二部分 湿性CAL技术复合CGF移植在颜面部凹陷畸形治疗的有效性和安全性研究 |
| 1 研究对象与方法 |
| 1.1 主要仪器设备 |
| 1.2 研究对象 |
| 1.3 手术方式 |
| 1.4 术后护理 |
| 1.5 目的组和对照组术后随访和统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 术后恢复及并发症情况 |
| 2.2 复诊超声回声观察 |
| 2.3 B超检查数据分析 |
| 2.4 二次手术情况比较 |
| 2.5 满意度调查 |
| 3 典型病例 |
| 4 讨论 |
| 4.1 研究背景 |
| 4.2 理论依据 |
| 4.3 临床效果分析 |
| 5 结论 |
| 进一步研究方向 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（10）基于IRE1α/JNK通路探讨解毒通络调肝方干预脂肪组织胰岛素抵抗的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词 |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 第一章 2型糖尿病胰岛素抵抗中医药研究进展 |
| 1 中医药对2型糖尿病的研究进展 |
| 2 肥胖与消渴病的关系 |
| 第二章 现代医学对2型糖尿病的研究进展 |
| 1 2型糖尿病的现代医学研究概述 |
| 2 内质网应激相关疾病的研究进展 |
| 3 肥胖2型糖尿病的胰岛素抵抗与内质网应激 |
| 实验研究 |
| 第一章 解毒通络调肝方对肥胖2型糖尿病大鼠的糖脂代谢影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二章 解毒通络调肝方对脂肪组织中内质网应激相关蛋白表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 解毒通络调肝方对衣霉素诱导的内质网应激脂肪细胞调节作用 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 结论 |
| 本文创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简介 |
四、3种方法对脂肪细胞损伤程度的人体实验研究（论文参考文献）
- [1]IL-17及炎症相关因子在脂肪组织中的表达[D]. 周峰. 华北理工大学, 2020(07)
- [2]热挤压3D打印构建大米淀粉-儿茶素复合物的消化性能及抗肥胖机理研究[D]. 郑波. 华南理工大学, 2020
- [3]葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠保护作用的实验研究[D]. 许皖. 北京中医药大学, 2020(04)
- [4]清热药治疗2型糖尿病用药规律及其对调节肠道菌群作用机制研究[D]. 王逗逗. 北京中医药大学, 2020(04)
- [5]基于RhoA/ROCK通路探讨逐瘀壮骨汤干预激素性股骨头坏死的实验研究[D]. 陈宁. 广州中医药大学, 2020(06)
- [6]脂肪细胞结构和活性对移植后脂肪存活的影响[D]. 何玉. 北京协和医学院, 2021(02)
- [7]骨痹通消方调节OPG/RANK/RANKL系统治疗激素性股骨头坏死小鼠的实验研究[D]. 芮仞. 安徽中医药大学, 2020(03)
- [8]蛋白核小球藻多肽调节脂质的代谢及机制研究[D]. 张睿林. 华南理工大学, 2019(06)
- [9]CGF复合湿性CAL技术修复颜面部凹陷畸形中的临床应用研究[D]. 李红红. 安徽医科大学, 2019(07)
- [10]基于IRE1α/JNK通路探讨解毒通络调肝方干预脂肪组织胰岛素抵抗的机制研究[D]. 姜晓天. 长春中医药大学, 2019(01)